TNF-α基因多态性在SARS发生中作用研究.pdfVIP

第九届全军流行病学·第八届全军防生物危害医学专业学术会议论文集 TNF-a基因多态性在SARS发生中的作用研究 魏茂提1韩技2何丽2张克菊2杨震2惠武利1胡役兰’王世鑫2 1武警医学院流行病学教研室天津300162 2武警医学院蛋白质组学实验室天津300162 necrosis 肿瘤坏死因子(Tumour factor，TNF)-a是…刀＼限基因编码的蛋白，孙限基因位于主 要组织相容复合物(MHC)．1II的中央部位。…于该基凶部位的特殊性，该基因可能与很多疾 病相关。因此，对该基因的多态性研究可以明确传染性疾病和炎症性疾病的易感性。TNF．Ⅱ是 炎症反应的关键性细胞因子，在早期起到促进康复，限制炎症发展的作用。但是，过量的TNF．a 表达，可能会造成疾病预后的不良。TNF．a表达的水平可能在基因水平受到调节，而办伊基因 表达的调节主要集中在启动子区，不同人群的启动子区多态性可能存在不同。 acute 严重急性呼吸道综合征(Severrespiratory 性有关，但是有些结果存在争议和不确定性。究其原因，可能与SARS感染的发生机理非常复 疾病进展中起到重要作用。为更加广泛探索SARS发生的易感因素，本课题对TNF-a基因启动 子区的多态性进行研究，以期明确该基冈区域的多态性与SARS发生及进展的联系。 l材料与方法 1．1研究对象 选择2003年4．6月期问某医院临床确诊并治愈的SARS患者75例作为病例组，均为汉族， 病例组之问无血缘关系，入院时符合我国公布的SARS患者临床诊断标准，并经实验室检测 血清抗SARS病毒抗体IgG刚性。同时，选取某学校入学的健康状况良好的学员92人作为对照 组，均为汉族，与病例组之问无血缘关系。 回顾SARS病人康复人员资料，根据临床症状参考重症SARS的诊断标准。具备以。F三项 之巾的任何一项，均可以诊断为重症SARS。(1)呼吸困难，休息状态下呼吸频率≥30次／min， 且伴有下列情况之一。a．X线胸片显示多叶病变或病灶总面移{在正位胸片上占双肺总面秋的l／3 以上。b．病情进展，48dx时内病灶面秋增大超过50％且在正位胸片上占双肺总面秋的1／4以上； mm mm (2)出现低氧血症，氧合指数低于300 Hg=0．133kPa)；(3)出现休克或多器官功能 Hg(I 障碍综合征(MODS)。 1．2TNF．Q基冈多态性位点检测方法 1．2．1粒细胞基凶组DNA的提取 盒(北京天为时代公司，2004．08—13)提取粒细胞基凶组DNA。 1．2．2 TNF．Ⅱ丛囚扁动子区的扩增 浓度为600nM，dNTP终浓度为0．1mM，lxBUFFER[15ram洲H4hS04，50raMTris-CI(pH=8．8)， 0mM EDTA．Na2，1．5mM 501xM MgCl2，1 100s、72。C 预变性5min后，94。C30s、65。C 第九屠全军藏行囊学·第八嗣全军防生物危害箧学专生学术会议论文集 产物大,J,：bn279bp．取7IIl产物经l燃脂糖凝胶电泳并观察电泳条带以确定分子量大小． 1．2．3 TNF电基因启动子区的多态性位点测定 采用双向序歹孽测定的方法进行瓶基因启动子区的多态性位点鉴定(序列测定由上海英 俊公司采用ABi nucleotide 377测序仪完成)．根据测定的序列。进行不同位点的SNP(Single polymorphismsites)位点确定。测定结果出现双峰，即为该位点的杂合子型，出现单峰为纯合 子型。 1．3统计学处理