肺炎球菌噬菌体裂解酶CPL-1的克隆表达、纯化与抑菌活性研究.pdfVIP

234 参评青年优秀论文 肺炎球菌噬菌体裂解酶CPL一1的克隆表达、纯化和抑菌活性研究 陆海荣1’2， 黄晋江2， 李斌宾2， 吴宏宇2， 陆 敏2， 黄青山“2 1．复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室，上海 200433；2．上海高科联合生物技 术研发有限公司，上海201206 摘要：目的利用基因工程方法制备肺炎球菌噬菌体裂解酶cpl_1。方法根据大肠埃希菌密码子偏爱性合成一段编码 度大于97％。经体外抑菌活性试验证明其对肺炎链球菌具有明显的抑菌效果。结论噬菌体裂解酶Cpl-1的开发利用为预防 和治疗肺炎球菌感染提供了新的方法。 关键词：肺炎链球菌； 噬菌体裂解酶； 大肠埃希菌 000 u，等 Cpl一1是肺炎链球菌的噬菌体CP一1表达的裂解酶，该酶由339个氨基酸组成，其分子量为39 B1—4糖苷键。体外杀菌和感染细菌的动物模型方面的实验证明其对肺炎球链菌具有很强的抗菌活性，Cp卜1 有望开发成为1个新的对付耐药菌感染极为有效的抗菌药物，因此具有良好的应用前景。 本研究将人工合成的肺炎链球菌噬菌体裂解酶Cpl一1基因插入pET28a载体，在大肠埃希菌中高效可 一步利用基因工程方法大规模生产Cpl一1奠定了基础。 材料与方法 一、菌株和质粒 院倪语星教授惠赠。 二、主要试剂和仪器 Mix 限制性内切酶、T4DNA连接酶购自NEB公司；琼脂糖、pUCMarker购自上海生工生物工程技术 有限公司；低分子量标准蛋白质购自AMRESCO公司；质粒抽提试剂盒、胶回收试剂盒购自上海华舜生物工 程有限公司；纯化填料购自GE公司。 三、c户乒1基因的获得 根据Cpl一1氨基酸序列，选用大肠埃希菌偏爱密码子，人工合成编码Cpl～1的基因序列，并在57端引入 Nco I位点，3 7端引入HindⅢ位点。cpl一1基因的人工合成由上海生工生物工程技术有限公司完成，合成基 因克隆于pUC57载体的多克隆位点，重组质粒命名为pUC57～cpl一1。人工合成的基因序列如下： CCATGGTTAAAAAGAATGATCTGTTTGTAGATGTTTCTTCCCAC AACGGTTAC ACTGGTATC GATATC CTGGAGCAAATGGGCACCACTAACACCATCATTAAAATT TCTGAATCCACGACCTATCTGAACCCTTGCTTGTCTGCTCAAGTGGAG TCC CAG AAC TTTTATCAC CGCTTT CCTATTGGC TTCGCA GGCGGTGACGTAGCAGAAGCCGAACGT TTC GAA CAGTTT CTGGACAACGTGCCTATGCAAGTTAAATACCTT GCG GTATTG GACGACCCAAGCGGT AAC GACTACGAG GACGCACAAGCG ACTAACGCATGCCTGCGC 参评青年优秀论文 235 TAT TTTATGCAGATGATTGCTGACGCTGGCTATAAAC