大气压非平衡等离子体喷流对白色念珠菌杀菌效果研究.pdfVIP

第二届全国微生物实用技术生态环境应用学术研讨会 大气压非平衡等离子体喷流对白色念珠菌的杀菌效果研究 陈娟华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科430022电 熊紫兰华中科技大学电气学院 指导老师：冯爱平教授华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科 卢新培教授华中科技大学电气学院 ． 摘要 目的初步研究探讨大气压非平衡等离子体喷流对白色念珠菌的杀灭作用及其杀菌机制。 方法白色念珠菌(Candidaalbicans)标准株C1a经大气压非平衡等离子体喷流不I司的放电气体 流量(He和O：)、不|一时间及作用距离的处理，观察其菌落生长情况；并利用扫描电镜与透射电镜 观察处理后念珠菌细胞壁、细胞膜等外部结构的变化以及细胞内超微结构的变化。 结果大气压非平衡等离子体喷流对白色念珠菌有很强的杀灭作用，其中通入的放电气体He／02 作用距离1cm的杀菌效果比2cm的明显。扫描电镜观察等离子体处理后的菌体细胞壁有不同程度的 破裂，菌体干瘪；透射电镜下可见菌体细胞壁、细胞膜破裂，胞内物质外漏，细胞内物质稀疏。 结论大气压非平衡等离子体喷流对白色念珠菌有明显的杀灭效果，且放电气体中氧气含量相对 越大，处理时间越长，作用距离越短，杀菌效果也越明显。其主要杀菌机制町能与等离子体中活性 粒子导致微生物细胞擘、细胞膜的破裂有关。因此，大气压非平衡等离子体喷流在杀菌灭菌领域和浅表 念珠菌感染的物理治疗等方面有，“阔的应用前景。 关键词等离子体白色念珠菌杀菌电镜 等离子体(Plasma)，是指高度电离的气体云，是气体在加热或强电磁场作用下电离I叮产生的， 主要由电子、离子、原子、分子、活性自由基及射线等组成。其中活性自由基及射线，如紫外线、 Y射线对微生物具有很强的杀灭作用…。但由于产生等离子体的方式不同，其对微生物的杀灭机制 也不|一。传统的产生等离子体的方式有两种：一是大气压下的高电压气体击穿rtl离(几千伏到上万 barrier 伏)，如相对低温的DBD技术(Dielectricdischarge)；二是真空室中的低温大面积放电心1。 而大气压非平衡等离子体喷流这项新技术突破性地在大气压下产生了低温均匀等离子体。当前，关 于其物理机制还有待进一步解释，而且其对微生物体的影响机制及杀灭机理也不清楚，已成为当前 研究的热点。尤其是本研究中使用氦气和氧气介入产生等离子体，属技术创新，其对微生物的影响 效果仍有待研究。 l材料与方法 1．1试验菌株：白色念珠菌Cla，华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科真菌室 提供 187 第二届全国微生物实用技术生态环境应用学术研讨会 1．2大气压非平衡等离子体喷流装置：华中科技大学电气学院卢新培教授实验室 此装置是一种基于DBD(电介质阻挡放电)的 GasInlet 等离子体喷流装置，当在进气口通入常用的较易击 穿的He或He的混合气体时，在针筒的出口(喷嘴 末端)处就会产生羽毛状的等离子体喷流。如右图 所示，在高压电极外包围着一个单端封口的ALz03介 质管，插入针筒内，介质管末端据针筒末端约5脚， 针筒末端的喷嘴长约5咖，内径约1．5舢，外径3咖。 产生的等离子体长度町达llcm。 实验中采用脉冲直流电源，放电电压8000V， 输出频率10kHz，脉宽1600ns，He和O：混合放电。 1．3菌液的准备：冻干菌种融化后，复苏划线接种予沙氏培养基平 板。于沙氏葡萄糖琼脂培养基上至少传代两次。取典型单菌落，以 无菌生理盐水稀释，电动混合器振荡20s，使真菌孢子悬浮均匀，血细胞计数板计数后，4℃备存于 当天使用。 1．4大气压非平衡等离子体喷流处理后的白色念珠菌生长情况观察 1．4．1白色念珠菌的接种 按上述方法准备菌液，血细胞计数板计数，调整菌悬液浓度。用微量取样器吸取0．1mL菌液加 于已准备好的培养皿中，涂匀。 1．4．2等离子体处理白色念珠菌 接种后的白色念珠菌，用等离子体(不同气体流量、不同时问以