第二节环境化学物的一般毒性及其评价.ppt

第二节 急性毒性及其评价方法 Acute Toxicity Testing 一、急性毒性的概念 急性毒性：是指机体(人或实验动物)一次或24小时内多次接触外源化学物后在短期内所产生的毒性效应。 包括外观改变、大体形态变化、行为方式及死亡效应，最主要观察指标是LD50 ?实验动物接触化学物的方式或途径不同， “一次”的含义也有所不同 经口和注射接触，“一次”是指在瞬间将受试化学物输入实验动物体内 经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次” 是指在一个特定的期间内实验动物持续地接触受试化学物的过程 二 、急性毒性试验的目的 1. 测试和求出受试化学物的致死剂量 (通常以LD 50 为主要参数)，并对该外源化学物进行急性毒性分级 2. 通过观察动物中毒作用表现、毒作用强 度和死亡情况，初步评价毒物对机体的毒效应特征、靶器官、剂量－反应关系和对人体产生损害的危险性 3. 为亚慢性及慢性毒性试验研究以及其他 毒理试验提供接触剂量和观察指标选择的依据 4. 为毒作用机理研究提供线索，了解中毒 效应的特征（包括症状，生理、生化与组织病理损伤） 5. 研究化学物急性中毒诊断、预防和急救 治疗措施 三、急性毒性试验方法的要点 (一) 实验动物选择 选择实验动物的原则： 尽量选择急性毒性反应与人近似的动物 易于饲养，试验动物操作方便 繁殖生育力较强，数量较大能够保障供应 价格较低，易于获得动物 常用实验动物为大白鼠和小白鼠 性别 ? 急性毒性试验所用的动物应当是雌、雄各半 ? 如果在研究中发现待测化学物对雌、雄动物的毒性大小有明显差异时，应分别求出雌性与雄性动物各自的LD 50 值 ? 如果试验是为致畸试验作剂量准备，也可仅做雌性动物的LD 50 试验 实验动物分组和数量 ?在利用不同的方法测定化学物LD 50 时，实验设计中对动物数的要求不同 ? 霍恩氏法测 LD 50 时要求有 4个剂量组， 每组4或 5只动物 ? 改进寇氏法、概率单位法、Bliss法测定则要求5－7个 剂量组，每组10只动物或10只以上 ?对于不同的化学物测定应根据其相应的试验规程确定实验动物数量 动物分组的原则：均衡性和随机性 均衡性：要求各组动物的平均体重及体重的离散度尽可能一致。具体来说是： （1）实验动物的体重不应超过全体实验动物平均体重的10％---控制离散度 （2）每组之间的平均体重相差不应超过 5％ ---控制均衡性 随机性：每只动物分散到各组去的机会是均等的，以避免成见或系统误差 实验动物的预处理 适应性饲养一周，选择生理健康的动物 凡经口染毒时，要求试验前要对动物禁食，以保证胃内无食物，减少食物对化学物毒性的干扰 大鼠、小鼠——隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物——每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水 (二) 受试物及处理 受试物的接受、分样、保管、称重、配制 以及在此过程中严格的质量保证影响急性 毒性试验 受试物剂型：水溶液、混悬液、油溶液 (三) 染毒方法 1. 经口(胃肠道)染毒： （1）灌胃： ? 空腹 ? 灌胃后2-3 h复食 ? 灌胃的体积不超过体重的1-2％： 小鼠为 0.2－1.0ml/只或0.1－0.5ml/10g较合适 大鼠为5ml/只(通常用0.5－1.0ml/100g） 家兔为10ml/2kg体重，狗不超过50ml/10kg 灌胃器具制作 取l2号普通注射针头，首先将针头尖部去掉，然后用细锉刀把去掉部分锉平、锉光，再用沙纸磨光滑，有条件时可在针尖处点焊成球型。加工成有20度弧度的灌胃针，连接1ml或5ml的注射器，即成为大小鼠的灌胃器。 灌胃操作方法 先固定动物,即用右手将小鼠尾巴提起，置于鼠笼或粗糙的平面上，当小鼠向前挣扎时，用左手的拇指和食指捏住小鼠两耳后颈背皮肤，翻转小鼠置于掌心，拉直后肢，以小指压住小鼠尾巴即可。在固定小鼠过程中，不要用力过大，勿握其颈部，以免窒息死亡。 以灌胃器轻轻压其头部，使口腔与食道成一条直线，再将灌胃针沿上腭壁轻轻进入食道，当灌胃针进入约3cm左右时即达胃内。 2. 经呼吸道接触 在常温、常压下为气态，或在生产过程中 和生活过程中以蒸气、气溶胶、烟、粉尘 状态污染生产与生活环境空气，此时就有 可能经呼吸道吸入。 吸入接触分为两种方式 ： 静式吸入 动式吸入 3. 经皮肤染毒 ? 研究外源化学物经皮肤吸收应当尽量选择皮肤解剖、生理与人类较近似的动物为对象，目前多选用家兔和豚鼠 ? 但由于研究化学物经皮肤吸收