分子生物学 教学课件 作者 郜金荣 主编 第三章 遗传物质维护 第三章 第二节DNA损伤修复和基因突变.pptVIP

尚辅网 尚辅网 第二节 DNA损伤修复和基因突变 DNA损伤是指在生物体生命过程中DNA双螺旋结构发生的任何改变。分为两类： 单个碱基改变 影响DNA序列但不改变DNA的整体结构 结构扭曲 对复制或转录产生物理性损伤 紫外线引起的DNA损伤修复大致通过四种途径： ①在损伤部位就地修复——光复活(photoreactivation repair)； ②取代损伤部位——暗修复或切除修复(excision repair)； ③越过损伤部位而进行修复——重组修复(recombination repair)； ④紧急修复——SOS修复。 一、避免差错的DNA损伤修复 DNA修复（DNA repairing）是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能 ，这种修复称避免差错的DNA损伤修复。 有些修复并非能完全消除DNA的损伤，只是使细胞能够耐受DNA的损伤而能继续生存。 1、光复活作用和切除修复 （1）光复活反应 在波长320-370nm（蓝光）的可见光中，由phr基因编码的光复活酶吸收光能，把能量转移给辅助因子FAD,激活的FADH通过电子转移引发胸腺嘧啶二聚体的裂解。 （2）切除修复 切除修复（excision repair）是通过一系列酶的作用，移除DNA链中的损伤部分，然后填充移除的DNA，这样使DNA恢复原来的结构。 包括： 碱基切除修复（base-excision repair, BER） 核酸切除修复（nucleotide-excision repair, NER） 碱基切除修复 首先，DNA糖苷酶特异性地识别受损伤位点，并在此位点切开N-β-糖苷键，在DNA链上留下一个无嘌呤或无嘧啶的位点，即AP位点。 接着，AP核酸内切酶识别该位点，并切开5′端的糖苷–磷酸键形成切口。 然后，DNA聚合酶Ⅰ填充缺口，DNA连接酶连接完成修复。 核酸切除修复：主要负责修复那些使DNA双链之间无法形成氢建以及影响区域性染色体结构的DNA损伤。 首先由DNA切割酶（excinuclease）系统在受损位点的5′和3′端分别切开磷酸二酯键，产生一个有12-13个（原核生物）或27-29个（真核生物）核苷酸组成的寡聚核苷酸片段 接着由DNA聚合酶I（原核）或ε（真核）合成新的片段填补留下的空缺，并由DNA连接酶将切口连接完成修复。 DNA错配修复（mismatch repaire，MMR）系统广泛存在于各种生物体细胞中，主要的功能是修复DNA复制过程中产生的错配，包括单个碱基的错配和2个以上碱基的插入∕缺失（IDLs）造成的错配。 2 重组修复 重组修复（recombination repair, ER），又称为“复制后修复” ，可以先复制再修复 。 首先，当复制叉遇到受损DNA位点时先停止，之后又继续复制，在新合成的子链中留下一个对着损伤位点的缺口。 然后，缺口链和另一条子链DNA上的同源链之间发生重组，在另一双链DNA上产生缺口。 最后，产生的缺口以正常链为模板在DNA聚合酶和连接酶的作用下给补上。 图3-25 重组修复过程示意图 非同源末端连接（nonhomologous end-joining, NHEJ）修复不需要任何同源DNA模板 ，修复蛋白可以直接将双股裂断的末端彼此拉近，由DNA连接酶连接，完成修复。 二、 避免差错的DNA损伤修复和基因突变 光复活作用不带来基因突变，是—种避免差错的DNA损伤修复作用。 uvr突变型的诱变行为证明切除修复过程中并不带来基因突变。 然而，也存在着一些修复机制容易引起基因突变，如recA的应急修复功能。 三、倾向差错的DNA损伤修复(应急修复反应 SOS)和基因突变 1、recA和lexA基因 recA和lexA这两个基因都是w－效应所必需的。 recA是重组基因，其产物在同源重组和w－效应两方面都起作用。 lexA编码一种阻遏蛋白，阻遏与SOS反应有关的一系列基因，recA则编码分解lexA蛋白的酶。 图3-26 RecA和LecA在SOS反应中的作用 2、SOS反应过程 SOS反应归纳为以下过程： （1）诱导前:与SOS反应有关的基因都受到lexA蛋白的阻遏，包括lexA本身。 （2）诱导 :紫外线、丝裂霉素C等都直接造成DNA损伤。细胞中的recA蛋白结合到诱导信号被激活。激活的RecA 引起LexA 产物和λ阻遏蛋白切割，结果一系列的SOS网络中的基因便开始转录。 （3）诱导状态 ：uvrA、sulA等基因转录。uvr基因编码切除修复的内切酶，争强