分子生物学 教学课件 作者 郜金荣 主编 第三章 遗传物质维护 第三章 第三节遗传重组.pptVIP

尚辅网 尚辅网 一、细菌转化 实质是单链DNA片段与完整DNA之间的重组，如下情况： ①切除外源DNA——无重组 ②切除受体DNA——发生重组 ③无修复作用 ——子代细胞出现两种基因型（受体基因型和重组体基因型） *通常采用有利于重组体基因型生长的选择条件 二、酵母中的转化 通过两次独立的复制过程修复双链断裂的DNA，每次各复制一条单链。 在双链断裂的DNA修复位点的两侧各形成异源二聚物区域。 形成两个Holliday交叉链的中间体。 通过拆分两个Holliday交叉而完成重组过程。 一、噬菌体的转导与整合 噬菌体的整合属于位点特异性重组过程 1. λ-DNA对E.coli的整合： POP’ + BOB’ →BOP’—POB’ 需要整合酶(Int—拓扑异构酶活性)和整合宿主因子(IHF)参与,非可逆反应。 2. λ-DNA从E.coli的切离： BOP’—POB’ → POP’ + BOB’ 需要整合酶(Int)、整合宿主因子(IHF)和切除酶(Xis)参与,非可逆反应。 整合的过程: A. 具有对特异性DNA强烈亲和力的Int与attP和attB位点结合； B. Int的拓扑异构酶活性，使两条双链各自断开一条单链，瞬间旋转然后交换连接，形成Holliday中间提， C. 在另两条单链之间发生同样的断裂重接，从而完成双链间的重组。 2. λ-DNA从E.coli的切离： 4、λ噬菌体DNA的整合机制 λDNA的整合涉及到attB 和attP的核心序列DNA链的割裂和重接，重组交换位点相距7bp。 首先在attB 和attP位点上产生同样的交错切口，形成了5’-OH和3’-P的末端。两个核心区的断裂完全相同，连接过程不需要任何新DNA的合成。 在整合反应中，互补的单链末端交互杂和、连接并完成整合过程。 二、细菌结合转移中的重组 F＋或Hfr 细菌环状DNA的两条链中的一条解开从5’开始，单链进入F细胞，进入的单链在细胞中进行复制，然后以双链形式与 F－的基因组联会，以链置换的形式单链插入F－的基因组 三、转导中的重组 转导分两种类型 ： 专一性转导(或称限制性转导) 普遍性转导 无论是专一性转导还是普遍性转导，转导的DNA片段都是双股DNA分子与染色体之间的重组。 转导也需要RecA和RecBCD蛋白质的参与。 转导过程中的遗传重组过程 由噬菌体携带的双链DNA 进入受体细胞 DNA以双链形式与受体 DNA联会 局部单链侵入，取代受体 的DNA片段 全部侵入两次双链交换， 产生重组 四、减数分裂重组 在一些真菌如粪生粪壳菌的非正常的子囊饱子的排列（5：3 6：2）等情况的出现与异源双链的形成与Holliday模型中的异源双链的形成和修复有关系，发生重组修复完全孢子排列正常，不正常修复则出现基因转换，它包括染色单体转换和半染色单体转换 一、RecA蛋白 （1） 活性 a、 RecA 有单、双链 DNA 结合活性 b、 RecA 有 NTPase 活性（底物差异活性） 与单链 DNA 结合时活性最大---依赖于 DNA c、 RecA 有启动一个分子的单链侵入到另一双螺旋分子的能力，即联会同源 DNA （但其靶 DNA 必须有缺口－－结合DNA） RecA引起的链交换和Holliday结构的生成 RecBCD酶 活性 RecBCD酶具有解旋酶活性和核酸酶活性 它能够在单链DNA上作一切口，为RecA蛋白提供单链末端，从而介导单链侵入同源双螺旋。 尚辅网 尚辅网 尚辅网 G C G TA CA T +/++/+-/- -/- +/++/++/+-/- +/++/-+/- -/- +/++/++/- -/- 有丝分裂 ++++---- ++++++-- +++-+--- +++++--- 正常4：4 6：2 不正常4：4 3：1：1：3 5：3 尚辅网 5：3 6：2 不规则4：4 尚辅网 第四部分 同源重组的酶和蛋白质 尚辅网 尚辅网 RecA引发链侵入模型 尚辅网 尚辅网 （2）RecA 蛋白催化双链和单链 DNA 的反应阶段 a、 联会前阶段（缓慢） RecA 与单链结合 b、 单链与双螺旋的互补链迅速配对，形成双链连接分子 Holliday（5‘侵入） c、 从双螺旋结构中缓慢置换一条链产生一段长的异源双链 DNA 反应结束时，RecA 结合到双链上 ?