酶法提取川芎多糖研究.pdfVIP

酶法提取川芎多糖的研究 丁文武12，王晓君，王维香· (西华大学生物工程学院，四川 成都610039) 【摘要】目的研究酶法提取川芎多糖的最佳工艺条件。方法采用单因素实验和正交实验研究了时间、温 度、pH值、酶加量四个因素对提取川芎多糖的影响．结果单因素实验确定了纤维素酶、复合果胶酶提 取川芎多糖的最佳工艺条件：纤维素酶O．15％，复合果胶酶6％，pH值3．5，时间150 min，温度60℃； 正交实验得到川芎多糖的最佳工艺条件为：纤维素酶0．15％，复合果胶酶10％，时间210min，pH值3．5， 温度60℃，在此条件下，多糖的提取率为3．03％．结论酶法提取川芎多糖简单、快捷，提取率较高． 【关键词】纤维素酶；复合果胶酶；川芎；多糖；提取 1前言 中药川芎(Ligusticumchuanxiong Hort．)最早记载于《神农本草经》，是伞形科多年生草本植物， 具有活血行气、祛风止痛、开郁燥湿等功效…。近年来，对川芎中化学成分的研究主要集中在挥发油、 内酯、酸性物质、生物碱以及有机酸等，对多糖的研究尚少口1。而大量的实验报告证实，多糖具有降血 糖和血压的功能，并可以通过活化造血系统和增强免疫力来提高机体对辐射的防护能力∞’，因此有效提 取川芎多糖具有重要意义。然而，目前提取川芎多糖多采用水浸提法晗’41。由于纤维素酶能够降解植物中 的纤维素，而复合果胶酶能够除去细胞壁中的果胶质和蛋白质，因此，同时使用这两种酶可以有效地破 除细胞壁，使细胞中的多糖溶解出来睁¨。本实验主要研究了采用纤维素酶和复合果胶酶提取川芎多糖的 工艺方法，为川芎多糖的进一步研究奠定基础。 2实验材料和方法 2．1实验样品、试剂和仪器 川芎购于成都中药材市场，粉碎后，于恒温干燥箱中干燥至恒重备用。 纤维素酶(上海伯奥生物科技有限公司)；复合果胶酶(广东环凯生物科技有限公司)；其他试剂均为 国产分析纯。 ． 精密科学仪器有限公司)。 2．2实验方法 2．2．1糖含量标准曲线制定 葸酮一硫酸法哺1。 2．2．2确定酶的催化反应条件 称取一定量川芎，加入不同浓度的纤维素酶和复合果胶酶，用不同pH柠檬酸缓冲液(g／v，1：20) 溶解，在一定温度下反应一段时间后，在沸水浴中加热5min使酶失活。过滤，滤液加1．5％活性炭脱色， 定容并测糖含量。为方便起见，糖含量用吸光度表示。 2．2．3正交实验 ‘ 分别称取一定量川芎，加入0．15％纤维素酶，料液比为l：20，复合果胶酶的酶加量和溶液的pH 以及加热温度和加热时间均按照表l的设定进行。反应完毕后将各样品在沸水浴中加热5min使酶失活， 过滤，滤液加1．5％活性炭脱色，定容并测糖含量。 2．2．4川芎多糖提取率的测定 438 解，在60C反应210min后，在沸水浴中加热5min使酶失活。过滤，滤液加1．5％活性炭脱色，并加1／4 mL左右，再向 体积的Sevag试剂(氯仿：正丁醇=4：1)除蛋白，反复操作3次后，将液体浓缩至15 其中加无水乙醇直至含醇量为80％，使多糖沉淀，静置过夜，抽滤，干燥得多糖称其质量。 3实验结果与讨论 3．1 纤维素酶量对多糖含量的影响 纤维素酶酶加量的测定结果见图l，从图中可见，样品的吸光度随着酶加量的增加而增加，但从O．15％ 至0．45％增加缓慢，这说明此时底物已经全部被酶包围，再增加酶量已经不能提高糖度，所以确定为纤 维素酶的最佳酶加量为0．15％。 048 0．475 ．0 47