现代细胞生物学研究方法 学生PPT.pptVIP

现代细胞分子生物学研究方法吴 乔Add：生物馆II 322Tel：座机电话号码qiaow@xmu.edu.cn2010.9 基因研究的各种方法 Northern blotting关键点：DNA探针，标记试剂盒（同位素和非同位素）；设内标；优点：特异性和敏感性高缺点：实验繁琐，同位素 RT-PCR RT-PCR主要由两大步骤组成，一是反转录（RT），二是PCR。它与普通PCR的区别就在于它是以mRNA为最初始的模板。 RT-PCR的用途很广泛，既可以用来构建cDNA文库，也可以获得感兴趣的基因的cDNA序列。如果以内源的一些参照为标准，还可以用于研究细胞内特定基因的mRNA的表达水平。 关键点：mRNA，相关引物， PCR仪 不足：只能相对定量，不能 绝对定量 Real-time PCR 实时定量PCR技术是近年来发展起来的一种新的基因定量检测技术，它通过PCR扩增中Tag酶的5’－3’的核酸外切酶活性，可以将标记在探针上的荧光基团一淬灭基团分离，使荧光基团脱离淬灭基团的控制，从而产生荧光发射。通过荧光吸收装置检测发出荧光的多少来反映模板量的高低，从而达到实时定量的目的。 关键点：引物设计，real-time PCR仪 原位杂交定位基因的表达 1， 组织/细胞固定----脱水----石蜡包埋----切片 2，DNA 探针的制备（地高辛或同位素标