酸碱度(pH)对对硝基酚(PNP)呈色反应研究与应用.pdfVIP

P)呈色反应研究及应用 酸碱度(pH)对对硝基酚(PN 李研 张孝山 李瑞兰 潘彤 【摘要】目的研究不同pH对对硝基酚(PNP)呈色反应的影响。方法：进行酸、碱性PNP吸收峰扫 描，在奥林巴斯AU一400自动分析仪上建立检测程序，评价不同pH缓冲液对不同波长下PNP吸光度变 nm～340 nm～420 化的影响。结果：酸性时PNP最大吸收峰为295 nm，碱性时PNP最大吸收峰为375 nm～41O nm；建立精密度检测参数。结论： 根据PNP呈色特点，检测自动生化分析仪340 nm精密 度，该方法简单、经济、可操作性强。 【关键词】酸碱度 对硝基酚(PNP)呈色反应 无色(酸性)变为黄色(碱性)。作者通过不同酸碱度的吸收峰扫描研究其呈色特点，并根据它的显色特 性，研究应用1种PNP水溶液同时做自动生化分析仪340nm和410nm精密度检测，现予介绍如下。 1．材料与方法 1．1材料 1．1．1 津)，艾科浦超纯水机(AUP一4—150G一2，重庆)。 1．1．2试剂：对硝基酚(PNP)AR，中国上海化学试剂中心化T厂生产；磷酸氢二钠，AR，天津市化 学试剂六厂生产；磷酸二氢钾，AR，天津市天河化学试剂厂生产。去离子水为艾科浦超纯水机生产， pH为5．9。 1．1．3PNP T作溶液：称取104．3PNP，置500 5．9的去离子水溶解并加 mg mL的容量瓶中，用pH 水至刻度，此为1．5mmol／L对硝基酚工作液。 1．998 1．1．4磷酸盐缓冲液：分别称取磷酸二氢钾和磷酸氢二钠4．559 mL的 g和1 g各自置于500 容量瓶中，用去离子水溶解并加水至刻度，使其浓度为67mmol／L储存溶液，测定pH分别为4．1和9．2。 7．17、7．38、7．73和8．04的缓冲液”l。 1．2方法 1．2．1 mmol／L磷酸氢二钠 PNP溶液的吸收峰扫捕：使用PNP溶液分别与去离子水(pH5．9)和67 uL比例混合均匀，分别将混合液置于光径lCM的石英比色杯中在岛 溶液(pH9．2)，按300pL：2700 nm的吸收峰扫描，观察PNP在酸|生和碱性溶 津UV一2100紫外一可见光分光光度计上进行690—_÷190 液中吸收峰的分布情况。 nm Flm和410 1．2．2不同pH对PNP吸光度的影响：根据PNP溶液吸收峰的分布情况，分别建立340 作者单位：300110，天津市血液中心 精密度检测程序。340nm检测程序：副波长为450 riln，反应方向为+，样品为10此(去离子水)，试 剂I为300 lxL(去离子水)，试剂II为25儿1．5mmol／L对硝基酚工作液，测定读点第l点为4，第2 点为20。410nm检测程序：副波为480 灿67mmol／L磷酸氢二钠溶液，试剂II为25肚1．5mmol／L对硝基酚工作液，测定读点第1点为4，第 2点为20。 1．2．3精密度观察：每日早晨取10支干净试管，加人去离子水进