四君子汤调控北京鸭肠道VIP+mRNA表达研究.pdfVIP

c只夕纩 ·t京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛，，论文集 P 四君子汤调控北京鸭肠道VImRNA表达的研究 张永东1 李玉冰1 许剑琴2 (1．北京农业职业学院牧医系北京102442) (2．中国农业大学动物医学院北京 100094) 摘要：本试验探讨了四君子汤对实验性脾虚鸭十二指肠、空肠VIPmRNA表达的调控作用。采用 利血平法建立北京鸭实验性脾虚模型，用半定量Rr—PCR法检测了十二指肠、空肠VIPmRNA表达 的变化。结果(J)实验性脾虚鸭十二指肠、空肠VIPmRNA表达降低，与对照组比较差异显著；(2)四 君子汤预防组VIPmRNA表达稍有降低，但与脾虚组比较比较差异显著；(3)四君子汤治疗组使VIP mRNA表达增高，与自然恢复组比较差异显著。结果提示四君子汤上调十二指肠、空肠卿mRNA表 达可能是其健脾助消化机制之一。 关键词：四君子汤；血管活性肠肽；脾虚；北京鸭；RT—PCR 四君子汤南人参、白术、茯苓、炙甘草组成，具有益气健脾之功效，主治脾胃气虚证…。对于中医 “脾”的功能，目前较多地认为与胰腺关系密切【2J。胰腺外分泌部所分泌的胰液，在消化中起着非常 重要的作用。目前认为，胃肠系统、中枢神经系统、肠神经系统三个系统的脑肠肽作为神经肽调控着 胃肠运动、分泌、吸收等复杂功能旧J。 血管活性肠肽(VIP)作为一种脑肠肽，促进胰腺分泌水、碳酸氢盐是其主要的生理功能H]。在胃 肠道其主要由十二指肠和空肠的黏膜层l型细胞分泌J。本试验利用逆转录聚合酶链式反应(RT— PCR)法检测了四君子汤对实验性脾虚北京鸭十二指肠、空肠VIPmRNA表达的影响，以进一步揭示 四君子汤健脾助消化的作崩机理。 1 材料和方法 1．1试验动物 北京鸭，体重为1．5kg左右的中雏公鸭，购于北京金星鸭业中心南口种鸭场。 饲料为不含任何药物、激素添加剂的中鸭料，购于北京金星鸭业中心南口种鸭场。 1．2药物 四君子汤各单味药均购自北京宏生堂药房。党参、白术、茯苓、炙甘草按2：2：2：1的比例先用蒸 馏水浸泡2小时，按常法煎煮两次，每次40分钟，滤出药液置70—80％的水浴分别浓缩成含生药lg／ ml浓度和含生药29／ml浓度，4c|C冰箱储存备用。 利血平针剂，为广东邦民制药厂产品，包装为每只1mg／ml。 1．3 试剂 产品，RNA酶抑制剂为Et本Takara公司产品，Marker为华美生物公司产品。 1．4造模及治疗 36只健康北京鸭适应性饲养3天，然后随机分为6组，每组6只，分别为正常对照组、脾虚模型 组、四君子汤预防组、四君子汤治疗I组、四君子汤治疗II组和自然恢复组。正常对照组肌肉注射生 “京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛，，论文集∥汐7 理盐水0．3ml／kg．d，连续14天。另外五组用利血平肌肉注射 0．3ml／kg．d，连续14天，出现摄食摄水减少，泄泻、体温降低、眯眼、倦怠不好动等表 现。正常对照组、脾虚模型组、自然恢复组、四君子汤治疗I组、四君子汤治疗II组、灌服lOml蒸 死，剩下的三组，停止注射利血平，同时治疗I组开始灌服四君子汤lOml(含生药19／m1)、治疗II组灌 后处死。 1．5取材 上述各试验组鸭处死后，立即取十二指肠、空肠，快速用灭菌生理盐水冲洗干净，液氮速冻后，转 移置一70℃保存备用。 1．6总RNA的提取及纯化 RNAIsolation 总RNA的提取方法按Total 1 System(Promega，目录号Z510)说明书进行。总RNA 经纯化(除去RNA中的DNA)后，浓度用紫外分光光度计(Effendorf 一稀释成1斗g／IxL。 1．7半定量RT—PCR【61 cDNA序列(ACCESSION X80906，AY251275)，进行BLAST分析后，用primer5．0软件设汁