胎盘、PBMC与HLA-DR等位基因在HBV宫内感染中作用的研究.pdfVIP

堑三星全垦主壹主逋塑堂兰堡查茎查金垫 ·14t· 胎盘、PBMC及HLA—DR等位基因在 HBV宫内感染中作用的研究 王素萍1，李铁钢1，y_效-91，冯永亮1，李淑珍1，史晓红1，魏俊妮1，双杰玉2，冯丽萍 HBV宫内感染是形成我国众多HBV携带者的 重要原因，但从危险因素到传播机制尚未阐明，至今 交法检测PBMC涂片HBV 尚无可靠的措施加以阻断和预防。本文用分子流行 司说明书进行；用双重原位杂交方法进行HBV 病学方法，对胎盘、外周血单个核细胞与HBV宫内 感染的关系以及HLA—DR遗传易感性进行了研究，ng／ml，分别以DAB显色10 色，核固红衬染观察结果。对照设置：阳性对照：经 以期为阐明HBV宫内感染机制、为HBV宫内感染 的预防和控制提供科学依据。现将近年研究的结果 PCR证实HBVDNA阳性PBMC制成的细胞涂片。 报告如下。 S区基因裸探针对照、 阴性对照：未标记的HBV Q汀M1基因裸探针对照和PBS空白对照。 1对象与方法 1．5 HBV宫内感染判定标准以及母．胎信息对的 1．1研究对象以2001年12月至2004年11月判定方法 经太原市各省市级医院筛检集中于太原市传染病医 新生儿出生后24小时内股静脉血HBsAg、 HBV 院妇产科进行产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇 DNA任一项阳性者判为HBV宫内感染。筛 及其新生儿作为研究对象。收集孕期及产后的临床 及流行病学基线资料，采集足月分娩胎盘、孕妇分娩 生儿为GSTMl基因缺失型(一／-)者作为信息对，将 前肘静脉血及其新生儿出生后24小时内股静脉血， GSTMl基因作为母亲的特异性等位基因，从信息 DNA 一20℃保存备用；采集足月分娩胎盘，石蜡包埋备 对的新生儿PBMC涂片中检测母亲GSTMl 用。 及HBV 1．2血清Imsag、HBeAg、HBVDNA检测用酶至胎儿的PBMC转运。 联免疫吸附试验检测孕妇和新生Jh)b周血HBsAg、 HBeAg，试剂盒由科华实业总公司生产，操作严格按操作严格按照说明书，同时将病理科确诊的肝脏组 说明书进行。荧光定量PCR法进行孕妇及其新生 织和胎盘组织设立为阴、阳性对照，包括：①阳性对 儿血清HBVDNA定量检测，PE5700扩增仪进行，照：病理科证实的耶sAg阳性的肝组织片；②阴性 根据阳性定量标准模板的扩增情况自动绘制标准曲 对照：血清标志物阴性孕妇的正常胎盘组织；③空白 线，计算待测样本中HBVDNA拷贝数。 对照：不加第一抗体，代之以PBS；④替代对照：以正 1．3 ttBV DNA及GSTMl探针制备重组质粒复 常鼠血清代替第一抗体作对照。 苏制备HBVS区双链DNA探针的制备，用随机引1．7免疫荧光双标技术检测胎盘组织中HBsAg和 物法进行DNA探针标记，参照德国Roche公司DIG PrimeDNA and DetectionStarterKit High Labeling 标记的羊抗鼠IgG、兔抗人白细胞介素6均购于武 说明书进行；用缺口平移法进行GSTMlDNA探针汉博士德生物工程有限公司。标本常规脱蜡入水， 标记，参照