5-氟脲嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡地研究.pdfVIP

5-氟脲嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的研究 崔韶晖 范圣第 刘睿 孙天明 曾凡博 （大连民族学院生物工程系,辽宁 大连开发区 116600） 摘 要 本研究使用人乳腺癌细胞系(MCF-7)和人宫颈癌细胞系(Hela)，在体外培养的肿 瘤细胞中，测定了 5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil，5-Fu)对肿瘤细胞生长繁殖的影响、有效 的诱导肿瘤细胞凋亡的浓度和作用时间。通过Leukostat 染色观察计数细胞凋亡的百分率， DNA 电泳分析了细胞凋亡出现的特异的DNAladder 现象。实验结果表明10～20mmol/L 的5- 氟脲嘧啶作用24 小时能够引起肿瘤细胞产生典型的凋亡现象。 关键词 5-氟脲嘧啶 肿瘤细胞 细胞凋亡 Abstract This study detected the effective concentrations of 5-fliorouracil and treatment times to induce the apoptosis of the MCF-7 cells and the Hela cells in vitro culture. Counted the cell apoptosis rate by Leukostat staining. Analysised the DNA fragments of the apoptosis cells by agarose electrophoresis. The results suggested that 10～20mmol/L of 5-Fu in 24h could induce the apoptosis of MCF-7 cells and the Hela cells and produced the characteristic phenomenon. Key words ：5-fluorouracil Tumor cells Apoptosis 引言 近年来，国内外一些研究报道氟脲嘧啶类药物具有一定的抗肿瘤活性，並有很大的临床 应用前景。氟脲嘧啶系嘧啶拮抗剂，属于细胞周期特异性药物，对细胞有丝分裂S 期最敏感， 可用于治疗消化道癌、乳腺癌、头颈部癌及滋养细胞肿瘤等多种恶性肿瘤[1] 。据文献报道氟 脲嘧啶抗肿瘤作用主要是在体内转变为氟脲嘧啶脱氧核苷酸（FdUMP ）, FdUMP 在辅助因 子 5,10 －亚甲基四氢叶酸（CH FH ）的参与下，代替正常的脱氧核苷酸（dUMP ）,与胸苷 2 4 酸合成酶（TS ）形成三联复合物，使TS 失活，从而阻断 dUMP 甲基化转变为脱氧胸苷酸 [2,3] （dTMP ）过程，使肿瘤细胞不能合成 DNA ，其增殖停止于Ｓ期而导致肿瘤细胞死亡 。 而对某些细胞来说,DNA 合成被阻断也可诱导细胞凋亡[4,5],因此，本研究从细胞凋亡的角度， 对 5-氟脲嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡进行了实验，当达到有效的诱导浓度时，其作用效果与作 用时间有一定的关系。通过形态学染色观察计数和DNA 电泳检测，结果表明，5-氟脲嘧啶能 诱导MCF-7 和Hela 这两种肿瘤细胞发生凋亡。 1 实验部分 1.1 实验材料、主要试剂与仪器 材料：所用细胞系为人乳腺癌细胞（MCF-7 ）和人宫颈癌细胞系(Hela)本实验室保存。 试剂：5-氟脲嘧啶（购于Sigma 公司），RNA 酶 A、蛋白酶K、DMEM、胰蛋白酶、琼脂糖、 Trypan Blue(购于Gibco 公司), DNA Ladder （购于大连宝生物公司），青霉素、链霉素、胎 牛血清、Tris-Baes、溴化乙锭（EB）、孔雀（石）绿、依红Y、亚甲蓝、天青A、丙三醇 、 溴酚蓝、氯化钠、碳酸钠等氢均为国产试剂。 仪器：CO2 培养箱（法国捷安7101）、倒置显微镜（美国ZEIZ）、凝胶成像分析仪（美国 KODAK）,其它：电泳仪、离心机、电热恒温水浴锅、精密PH 计、紫外线透射仪、超净工作 台等为国产。 1.2 实验方法 1.2.1 细胞培养 冻存细胞复苏后，用DMEM