大肠杆菌植酸酶appA的融合表达和耐热性研究.pdfVIP

大肠杆菌植酸酶appA的融合表达及耐热性研究 乔代蓉徐辉 白林含曹 毅 (四川大学生物资源与生态环境教育部重点实验室 四川省生物信息与代谢工程共享实验平台，四川成都 610000) 摘要：目的研究大肠杆菌植酸酶appA基因在pET32a(+)中的融合表达，获得活性 高、耐热性强的植酸酶。方法提取大肠杆菌(SUGL)基因组DNA，通过PCR方法从基因组 扩增得到植酸酶基因appA，测序结果表明该基因的ORF读框包含1299个核苷酸。将该基因 IPTG浓度 诱导表达植酸酶，表达量达到10％以上。在37℃，用钒钼酸铵法测定了表达的植酸酶活性为 40740．7U／g，同时观察不同加热温度对植酸酶活性的影响程度。结论融合表达的植酸酶的耐 热性得到提高。 关键词：大肠杆菌，植酸酶，重组appA，耐热性 the of moietiesfrom Abstract：Phytases acid， catalyzehydrolysisphosphate phytic inthelOSSof of acidtochelatemetalions．The thereby，resulting abilityphytic ofanimalfeedwith increasesthe of in supplementation phytase bioavailabilityphosphorus animalsbesides the intheareasofintensive monogastric reducingphosphoruspollution livestockunits．The whichisa candidateforindustrial of phytaseappA promising production feed was was cloned chainreaction enzymeintroduced．PhytasegeneappA bypolymerase (PCR)．The wasthenclonedintothe vector geneappA prokaryoticexpression pET-32a．In the BL2 host 1(DE3)，the was wastestedunder phytaseappAexpressed．The phytaseactivity different andits wasresearched． temperature thermostability words：Escherichia Key coli，phytase，recombinantappA，thermostability 植酸酶属于磷酸酶类，广泛存在