电针对去卵巢大鼠垂体功能调节机制地研究.pdfVIP

电针对去卵巢大鼠垂体功能调节机制的研究 中国人民解放军总医院神经信息中心 田淑君尹岭 老年妇女卵巢发生退行性改变，致使下丘脑一垂体一性腺轴之间的平衡制约关系失调，出现某些 病理生理的改变。研究老年妇女性激素的变化及调节机制，对抗衰老与预防老年疾病的发生具有重 要意义。雌激素替代疗法(ERT)可以缓解某些临床症状，但其副作用和患乳腺癌的危险令人担心，近 年来大量临床实践发现，针灸治疗能调节老年的神经内分泌功能，且无毒副作用，但其机制还不清楚。 SP在中枢神经系统分布广泛，生理效应复杂，在神经系统和非神经系统之间起桥梁作用。尤其是介 导免疫系统、神经系统、内分泌系统间的作用引起了人们的重视。“足三里”穴是治疗更年期综合症的 主要穴位，探讨电针足三里穴对神经内分泌的调节作用有助于阐明针灸治疗更年期综合症的机制。 为此，本实验以去卵巢大鼠作为实验动物模型，观察电针“足三里”穴，血中E：、FSH和LH水平的变化 与下丘脑SPmRNA表达的关系。其目旨为阐明针灸调节生殖内分泌功能紊乱，治疗女性更年期综合 征及抗衰老的机制提供实验依据。 l材料与方法 1．1动物处理及分组选用6月龄Wistar雌性大鼠，体重160克左右，实验分为三组：正常对照组 卧位，常规消毒，腰背部切口，取出双侧卵巢后缝合切口。实验动物由解放军总医院实验动物中心提 供，饲养条件：室温20～25℃，12小时光照，12小时黑暗，自由摄食饮水，通风良好。 1．2电针处理确定大鼠双侧“足三里”穴，针刺入5ram深，接电针仪。刺激参数为：疏密波，频率 约为4Hz，15分钟／次，隔日一次，针刺组于切除卵巢6天后给予电针刺激。根据华兴邦等制定的大鼠 穴位图谱，确定大鼠双侧“足三里”穴，刺人5mm深，接电针仪，频率为4Hz，强度2，参照沈晓明等的 方法，调节刺激强度，以使大鼠后爪微颤为宜，15分钟／次，隔日一次，3组大鼠在同样条件下饲养30 天后处死取血、垂体和下丘脑。 1．3血中激素的测定各组大鼠分别断头取血，离心，分离血清，使用卫生部上海生物制品所提供 的放射免疫试剂盒，按照试剂盒说明书操作。血清中雌二醇E2的结果以X10“2mol／L表示，FSH、LH 的测定结果以×10。3IU／L表示。质最控制标准，批内变异系数10％，批间变异系数15％。 吻侧之前联合，尾侧至乳头体后部，外侧为下丘脑外侧沟，背侧之前联合水平高度。所取组织包括下 丘脑底侧区、下丘脑前区和视前区。采用异硫氰酸胍一酚一氯仿抽提方法，提取脑组织的RNA，使用 PCR仪，在逆转录酶Superscrip GAGCCC1]盯GAGCATCT 室协助设计，北京赛百盛公司提供产品，sP的上游引物序列：5’CCC CAT AGGAGGTCACCA 3’，下游引物序列：5’CTG TA3’，退火温度56．2℃。大小为453个bp， 循环次数为32个。选择在大多数细胞内均为高表达的磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内对照，其 1TCACC ATCACCATCTIC AccTrG 上游引物为：5’TGC rI，】旧AT3’，下游引物为：5’CCC CAG ×TAE为电泳缓冲液，在1％琼脂糖凝胶上电泳约1小时(电压为50V)，电泳时每条带代表一只鼠RT Docl000 —PCR产物的结果，三条带为一组，每个样本重复电泳三次。放入BIO—RAD公司产的Gel 4．0分析软件测得电泳图谱 型凝胶图像系统分析仪，紫外灯下显影，数码相机拍照，使用Image—glub 上每条基因条带的光密度值，计算每只大鼠SPmRNA与GAPDHmRNA产物的光密度比值，再比较各 一141— 组间SP／GAPDH值的大小，进行统计学分析。 l 5统计学方法实验数据以均数加减标准差，两组闭比较采用I检验。P005时