脐带血造血干细胞采集、分离和冷冻保存研究.pdfVIP

创新交流 CHINASClENCEANDTECHNOLOGYACHIEVEMENTS 脐带血造血干细胞采集、 分离和冷冻保存研究 文／刘忠1孙自敏2吕蓉1李敏1郭晓睫1方勤1周学勇1刘会兰2丁利1杨红友3 (1合肥市中心血站，安徽合肥230031；2安徽省立医院，安徽合肥230001； 5加拿大多伦多脐血库Toponto，Canada) 擅 要：目的：优化脐带血造血干细胞采集、分离 至一150。C之间，结果均无显著性差异。结论：优化的脐带 和冷冻保存的方法，初步探讨建立脐带血遣血干细胞库 血遣血干细胞采集，分离和冷冻保存的方法，造血干细胞 的系统方法。方法：运用抗凝、密闭式血袋无茵采集符 回收率高，可以满足普通病人造血干细胞移植的需求。 合要求的足月顺产或剖宫产新生儿脐带血，进行相应的 关键词：脐带血；干细胞；低温保存 微生物项目检测及HLA分型检测，采用二次回浆再提取 DOI：1 的方法分离制备脐带血有核细胞(Nc)，并通过对不同 的降温速率优化脐带血遣血干细胞的冷冻保存及复温方 造血干／祖细胞移植(HSC／HPCT)已广泛用于 法，对复温后的脐带血造血干细胞进行计数及活性检测。 治疗多种恶性血液系统疾病。研究表明，脐带血含有丰 结果：共收集脐带血49份，筛选并冷冻保存了26份，富的造血干细胞及造血刺激因子，T淋巴细胞功能不健 所收集的脐全血体积124．6±26．27删，NC总数(1．64士全，对HLA相合要求不严格，正常情况下不含细菌、 0．94)×109；分离后脐血体积25．77士1．45ml，NC总数病毒或肿瘤细胞，建立脐带血造血干细胞库已成为近年 (1．52-i-0．89)×109，回收率为(92．12土5．78)％。分来造血干细胞移植的最重大进展之一。本文通过优化脐 离前后细胞活性台盼蓝拒染率分别为(96．8士1．14)％带血造血干细胞采集、分离和冷冻保存的方法，初步探 和(95．7土1．63)％冻融前后Nc总数分别为(2．16士0．79)讨建立脐带血造血干细胞库的系统方法。 ×109和(1．97±0．95)×109，NC回收率(92．97土7．55)％， 一、材料与方法 台盼蓝拒染率分别为95．7％和96％，CD34+细胞数分别 为(8．02士4．61)X106和(6．89士4．15)×105，cD54+ 1．脐带血采集 细胞回收率(85．56±5．27)％，粒单系细胞集落形成单脐带血由安徽省立医院，合肥市妇幼保健医院等提 位(cFlH3M)回收率(91．45士5．44)‰脐血遣血干细胞供。采用抗凝(ACD-B)、密闭式血袋在脐远端近胎盘 在冷冻保护剂和复苏方法相同而降温速率不同的情况下， 8～10cm处穿刺收集脐血，采集后室温保存，24h内分 4C～-40。C时采用l。c／嘲的降温速率优于5。c／r咖的降离处理。各项检测标本取自留样管。 温速率，一40。C～-90‘C时采用IC／嘲或5C／咖的降温 2．脐带血NC制备 速率以及在置一196。C液氮保存前自-40。C降至-go。C或降(1)将采集的脐血试管留样lml并称重，计算脐血 万方数据万方数据 创新交流 中困科技成果＼2009年＼第Ol期＼编辑＼胡杨＼E-mail：zhyh@csta．org．cn SCIENCEANDTECHNOLOGY CHINA ACHIEVEMENTS 体积}以1：4(脐血为4)的比例向脐血中加入羟乙基淀胞率=活细胞总数／(活细胞总数+死细胞总数)× 粉(HES)，充分混匀并静置5分钟后以509离心，离 心时间根据脐血的体积来确定，分出脐血的上层液体至 用Becton 100毫升的转移袋内，脐血原袋保留待用；将转移袋以 4409、lOmin离心，上清液加回到原脐血袋内并混匀，脐带血干细胞，37℃、5％C02饱和湿度培养14天，用 下层脐血干细胞留在转移袋内待用，将混匀后的脐血袋 倒置显微镜计数40个细胞以上(冻融后8个以上)组成 以509离心，7离心时