海洋小单孢菌AM105液体发酵生产抗生素地研究.pdfVIP

海洋小单孢菌AMl 05液体发酵生产抗生素的研究 黄惠琴，吕家森，欧阳范献，鲍时翔 (中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海口571101) 金黄色葡萄球菌是引起化脓性疾病的重要致病菌，也是毒力最强的化脓菌，国外有人称其为“食人 菌”。随着抗生素的广泛应用，其耐药菌株日益增多，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methicillin—resistant Staphylococcus 高，已经成为临床治疗的一大难题…。MRSA是Jevons 剧增多及至遍及全世界，且耐药范围日趋扩大，耐药程度日趋严重，已成为全球性的难题。由于目前治疗 MRSA感染可选择的药物很少，只有万古霉素是可靠的敏感药物。更糟糕的是，1996年5月在日本发现了 intermediate 对万古霉素不敏感的金葡菌(vancomycin staphylococcus 年美国也发现了两株VISA，给临床治疗提出了严重挑战。 海洋生物作为药物的来源，在抗菌、抗病毒、抗肿瘤等方面具有很大的潜力，其中相当部分生物活性 物质是陆地生物所没有的，从海洋微生物中寻找结构新颖、生物活性特殊的抗生素，更具有得天独厚的价 值，并受到各国研究者的广泛重视拉3。从海水中分离的顶头孢霉菌株培养液中获得的头孢菌素 海泥中分离得到一株放线菌，在含海水的培养基中进行振荡培养，从其培养液中提取的伊他霉素 人们对海洋微生物及其应用的认识相对落后，随着研究的深入，人们将会发现更多的海洋微生物所产生的 生物活性物质及其用途。 本课题组在开展海南海域海洋微生物的分布及其活性物质研究中，从红树林根际淤泥中分离获得一 株能有效抑制MRSA的菌株AMl05，初步鉴定为海洋小单孢菌。本文对其抗生素发酵合成条件进行了研究。 1．材料与方法 1．1活性菌株的分离 1-1．1菌株来源 菌株AMl05由本实验室从海南红树林淤泥中分离得到。MRSA菌株由海南省农垦医院提供。 1．1．2培养基组成及培养条件 斜面培养基：高氏一号培养基，海水配制。 28℃，200r／min，6d。 1．2茵种培养 菌种活化：将砂土管保存菌种转接，28。C斜面培养6天。 培养36d。因菌落成硬块状，种子培养基中加入少量小玻璃珠利于菌丝的分散生长。 ·326· 1．3活性检测 离心收集发酵液，采用纸片扩散法初测，加样量10pl，测量抑菌圈直径，圈越大则抗生素活性越 高。 2．结果与讨论 2．1不同碳源对茵株AMl05产抗生素的影响 ， 碳源是构成细胞组织和供给菌丝生长发育所需能源的主要物质，因而适宜的碳源对菌株的生长和代 谢产物的生成至关重要。选用基础培养基，分别以1％的葡萄糖、乳糖、蔗糖、可溶性淀粉等成份代替基 础培养基的淀粉，摇瓶培养，测发酵液抑菌活性，结果如表1．葡萄糖作碳源效果稍好，但四种碳源差 异不大，均能有效合成抗生素，考虑到实际生产中淀粉容易获得，且成本低廉，因此优先选择淀粉。 表1 碳源对抗生素形成的影响 采用不同浓度的葡萄糖、淀粉进行发酵实验，研究碳源浓度对抗生素合成的影响，结果如表2。葡 萄糖能促进抗生素产生菌的生长，但在高浓度-Ft$降低许多抗生素的生物合成，即“葡萄糖效应”n1。 当葡萄糖和淀粉浓度分别为1％和2％时，菌株产抗生素量达到最大值。 表2碳源浓度对抗生素形成的影响 宰抑菌圈直径(单位：咖) 2．2不同氮源对菌株AMl05产抗生素的影响 氮源是构成细胞的重要成分之一。采用基础培养基，分别以1％的玉米粉、大豆粉、酵母膏、蛋白胨 和NH,NO。等成分作为氮源，摇瓶培养，测发酵液抑菌活性，结果如表3。玉米粉、大豆粉、酵母膏作氮 源效果稍好，能有效合成抗生素。 表3氮源对抗生素形成的影响 采用不同浓度的玉米粉、大豆粉、酵母膏进行发酵实验，研究氮源浓度对抗生素合成的影响，结果 如表4。当大豆粉、酵母膏浓度为O．5％时，产生的抗生素量达到最大值。