基于微流控混沌混合地核酸杂交芯片研究.pdfVIP

微搋摔。拉j}宴验室进胜 基于微流控混沌混合的核酸杂交芯片研究 李春宇秦建华‘林炳承+ 中国科学院大连化学物理研究所人连116023 一引言 DNA微阵列是一种将数以于计的寡棱皆酸，cDNA和PCR产物固定丁同体支持物上用 于人规模检测靶基因的有力l‘具。Ⅱ前DNA微阵列分析主要包括DNA纯化，DNA扩增， 杂交反应，信号采集及处理笛过程分别离线进行，比较繁琐，时间较路，重复差。微流控技 术作为一种新型的技术，其有多种单元之间规模组合灵活集成的特征，有可能将整个DNA 微阵列分析过程集成在一个单一‘的微型化的芯片上。作者目前的l：作主要集中杂交反应过 样，目的在丁快速，有效，准确获取杂交信息。在静态微阵列实验中，杂交方式主要是以扩 散为主，耗时较长，杂交过程火约需要8—24小时。近年来，已有不少研究者利用微流控技 术如利J；|=|水泵推动靶分子在通道中连续流动¨“，降低通道高度减少扩散距离，利用主动混 合器如超声等来缩短杂交时闭。作者利用微流控芯片中的被动式的澍沌混合器，通过通道上 譬的凹槽结构产生的濉沌流促进靶分子与DNA探针的接触，加快杂交速度，以用于快速临 床基吲诊断冠I环境病源微生物豹检测。 =实验方法 1 微溜沌混台器的铀建 利用两水平蚀刻的方法，制作SU8模版。第～层先制作通道结构，第二层作不同结构 2 聚丙烯酰胺凝胶垫制作及寡梭茁酸确定 聚丙烯酰胺凝胶基质通过光引发聚台凝胶垫，垫子之间间隔为200um。制作示意|墨|见 幽2。将凝胶垫浸于戊一醛中过夜，DI水洗净，吹干。N端氨基修饰的寡核茁酸同定于 凝胶垫上，4U保存。 3 DNA杂交实验 将微混沌混合器在显微镜F与DNA阵列对准封接。用注射泵将FITC标记的靶分子寡 棱营酸溶液推入通道中，推进2u1辑回抽2ul，如此反复。 三结果与讨论 i；i静；i：iii端i；i；；0豁“9～ 芯“单儿技术 l微混沌混合器的性能考察 没计3种混沌溜台器，分别是斜纹式，对称人字形和币对称人字形，比较其混合效果 结果表明彳；对称^字形式混台效果虽好，见翻3， 2聚丙烯酰胺凝腔垫制作 结果见图4。 3 DNA杂交实验 F1TC酥记的靶分子寡核前酸浓度为lxl04M，在存盘恺沌流时，杂交时间200s，杂交 信譬已达到最大，而无混沌流的尔交尚术完全，结果避嘲5， 囤4臻W烯蕺胺凝腔女 目5DNA杂交#※． ^正泥№捏☆B育≈№棍音．≈*子浓度Ixl01M．杂i时目2005 四小结 提供了一种利用混沌流促进袋交的方法，具有简单快速的特点，可硐于快速临床基 因诊断和环境病枨微生物的检测。 赢参考文献 n] 冒卸B Y．Vaidya，2呻3M…r8，{assembledinⅢicrofluidiefabricated thedet，ectl…ofI chips fH”舯『y(脯thyl methaerylatv)for 曲uMam0N^口uL㈣isAriaICh锄75(5)ll∞一1140 [2]Itaslli_to,2006 ～jy…ech…ctlon／n明sedet……acti邮／hbrld{ntl蚺as辅ys*1ng f1…thaidtctofluidlcdwicesforthedei剧,tl∞ofI㈣dant洲^…㈨棚is giosensBillccIⅫ 21 1915一lgz3