挤压驱动-微流控芯片聚合酶链扩增反应系统地研究.pdfVIP

徽流挡，苎“实验宅进碰 挤压驱动一微流控芯片聚合酶链扩增反应系统的研究 徐章润 f r欣F建华方肇伦‘L／ 东J￡人学分析科学研究中一乱沈刚110004 Chain 聚台酶链反应(PolymeraseReaction，PCR)是种体外核酸扩增技术，j；前特异性 强、灵敏度高等突Ⅲ优点，已』’泛啦J|{丁稿床检删等山喵。PCR反府器的微型化，为其特 来r扩增速率快，试剂消耗少、集成化帛I自动化群度高等优剧”。而连续流动式微流控芯片 PCR，通过空问变换完成温度循珂=，史兵快速扩增的{许力”I。书文利用聚一甲堆硅氧烷 (PDMS)气动剃的i．件担理”o，提出丁种“挤压”驱动方式，凌驱动方式能更快地完成 试被空间转移，【4寅现快速循环流动芯片PCR． 为实现挤脉驱动{1ij环流动式PCR．将衔环通道醴计戚1}地：角形．二条让分荆为-，} 黼K的反应腔，每个反应腔对麻基气动控铝《通道。PCR芯片结构共分凹鹾，如削J。第 层为气体控制避道堪，由j0；1的PDMS弹r主体+_蚓化剖浅旨均匀后，在SU．8腔…橙卜浇 铸而成：第一层为流体通道屡(卸PCR反应腔)，南PDMS预聚物在SU一8胶爵1膜L甩，}；=制 得：第一层为保护通道腠，制作方法o，流体通道层相同，其作J|fj是往其中危满水肝．防lr PCR反廊渡蒸发：第四层为氧化|l冈锡fITO)薄膜玻璃加热层，二三个{{}l透明ITO玻璃锖《作的 100铂电}且温度传怂器及PID 薄膜女lj热器分别’o一个反应腔对应，加热器温度由蛄片式Pt 算法控制。州层琏片采川I；fj=町逆方式封接枉起，形成流体拄制、反廊脏和加热器集成化的 PCR。嚣片。 八 √／＼ ／＼ ．．j●______L 1—_1广 目1挤Ⅱ％自循#i自#*镕构幂t目 本文Ⅲ高压鲺气作为气源，气源‘』控制通道间的通断n|微，刊电磁蚓控制，如图2。挤压 驱动的循环流动控制山式如F：芙刚PDMS蚓a、c。打开其它阀，使开通的A反应腔充满 PCR反应披，然后关闭矧d、et将溶液封闭冉·_角形通遁中；尚c阀开通，充满溶液的反 麻胯A所对应的阉b关闭时，溶液就被挤压到敞开鹄反应腔E中；始终操持两个阀荚闭、 一个划开通，并币断地切换开芙状态，就蛮现了溶液在封鲥三角形通道中的循环流动：一个 循环过程中，溶液流经PCR反应所需的三个濂区，即完成变性、邀火、延伸过程。对于2-20 阻，的反应腔，当气动气压为0．7个人气压时，溶液从一个反应脖转移至另一个厦应腔的转 移时间均小于ls。 №m#东^：^肇伦 口 ■ ^¨’ w，- 目2挤Ⅱ％自菩片嗽系统控制示意霉 c，d D，变性医^，遏^E．E．《#Ⅸ…be#Ⅲ自P吣≮自目 蛆挤压驱动的循环流动方式，在16win内完成了144DNA片段的PCR扩增。PCR bp 反应液(20皿)按以F组成配制：灭菌取蒸水11 混台物1．6／aL，引物各1 2¨L三个温区的温度分别控制在94℃-55℃，72℃，每个循环30s，共循环30次。 2100苍片电泳分离分析，结果如翻3所示。 扩增产物由Agilent 目3侪Ⅱ#自唧tm掉菩片啪##P％自#ng目 L，DNAImdder1．4目2，5H“自2十#R户cRF#：3自#‰P曲十％ 参考文献 S，xuJLMaW LFORmicr。fluidicdevilsforDNA …AⅫgC L，A¨gW