重组人溶菌酶转基因鸡地研究.pdfVIP

。鬻黼藏黼麟赫蘸纛鬃黧黧黛绷黼黼豳豳藤潮蠢满黼赫黼黼 壤黼黼黛鳓麟蠹囊麓藕豢潮■圈—震鞘阐麓—豳黧黧 论文集 一 重组人溶菌酶转基因鸡的研究 汪海，韩红兵，连正兴 中国农业大学动物科技学院，北京100193 关键词：人溶菌酶；转基因鸡；双歧杆菌 ～ jI旨 溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，又称为胞壁质酶或p(1，4)一N一乙酰葡萄糖胺酶。 溶菌酶参与机体内多种免疫反应，在机体正常防御和非特异性免疫中具有重要作用。鸡中溶菌酶主要来自于 蛋清，约占蛋清总量Go．3％。而人溶菌酶比蛋清溶菌酶具有更高的溶菌活性和热稳定性，因此制备重组人 溶菌酶转基因鸡对研究提高抗病力鸡群具有重要意义。 材料与方法 Blot对获得转基因鸡鉴定；通过定量 利用慢病毒法制各人溶菌酶转基因鸡，并采用PCR和Southern 与15只同周龄公母比例相同的非转基因鸡粪便，并进行肠道微生物组成结构检测。统计分析同日龄出生的 转基因鸡和非转基因鸡出雏数，健雏数，出生重，6周龄体重，6周龄胫长等生长指标。 结果 Blot鉴定，得到转基因鸡38只(20专 PCR双阳性率公鸡达至rJ60．4％，母鸡达到64．5％。再进行Southern 达量，得出在血细胞中转基因组溶菌酶的表达量高于非转基因组，且转基因组溶菌酶表达量是非转基因组 溶菌酶表达量的10倍(p0．05)，具有显著差异。对转基因鸡和非转基因鸡进行肠道微生物结构检测得出 转基因组肠道双歧杆菌数量是非转基因组的1．98倍(p0。05)，具有显著差异。对转基因鸡和非转基因鸡 出雏率，健雏率，出生重，6周龄体重，6周龄胫长等生长指标进行t检验得出6周龄体重转基因鸡与非转基 因鸡差异显著(p0．05)，转基因鸡高出非转基因鸡259。而在出雏率，健雏率，出生重，6周龄胫长等生 长指标上转基因鸡和非转基因鸡比较并无显著差异。 讨论和结论 F2代转基因鸡阳性率母鸡达至1J26．1％，公鸡达至1J34．5％，与文献报道的利用慢病毒载体介导法制备转 基因鸡目的基因遗传给后代的遗传率范围4％．45％相符。定量PCR得到转基因鸡各组织、器官人溶菌酶的 表达均无显著差异，可能是由于CMv启动子受到表观修饰，导致基因表达抑制。转基因鸡血细胞溶菌酶表 达量是非转基因鸡溶菌酶表达量10倍，可能原因是插入的外源人溶菌酶片段整合到鸡造血干细胞中，导致 转基因个体血细胞中表达高水平人溶菌酶。转基因鸡和非转基因鸡在生长指标上测定的结果显示人溶菌酶 对生长期蛋鸡后天增重上具有促进作用。在双歧杆菌是肠道有益菌群，在肠道微生态中，双歧杆菌的比例 增加一定程度抑制了有害菌群的滋生。而转基因组肠道中双歧杆菌数量显著高于非转基因组，推测转基因 鸡较正常鸡可能表现出生长性状优良及强抗病力等特征。当前这些研究都是初步的，下一步准备对转基因 鸡蛋白功能进行验证，以及探讨人溶菌酶对机体的具体作用机制。 致谢 首先非常感谢连正兴教授对本实验的悉心指导和大力支持，还要感谢韩红兵副教授对我学习与工作中 给予的耐心指导和无私帮助，当然还有实验室全体亲爱的同学们对我一成不变的关心、帮助和大力支持， 谢谢你们1 144