猪BMP-15与GDF-9报告载体的构建及其组织特异性表达研究.pdfVIP

、■墨， T黧he暨新疆畜牧科学院第六次学术年会—曹鬈，雹j，Seven辫thNationa黧Confere然nceofAni冀maBiotech研nolo萝gy乞如 猪8^护．J『5和GDF-9报告载体的构建及其组织特异性表达研究 秦明鸣，万千惠，王华岩 西北农林科技大学动物医学院，陕西省干细胞工程技术研究中心，杨凌，712100 关键词：猪；启动子；表达调控；BMP-15 引言 骨形成蛋白．15(Bone differentiation morphogeneticprotein一15，BMP．15)与生长分化因子．9(Growth factor differentiationfactor 9，GDF一9)同属于转移生长因子一B(TransformingB，TGF一13)家族的成员，具 有相似的生物学功能。对猪BMP-15和GDF-9基因的表达调控及其生物学效应的探索，有助于开展干细胞转 分化为生殖细胞的研究，对上述基因在生殖发育中的调控作用有进一步的了解。 材料方法 本研究首先从猪的9种不同组织(卵巢、睾丸、胃脏、肝脏、肌肉、肾脏、心脏、胸腺、肺脏)中提 取总RNA，采用定量RT-PCR方法检测上述两个基因的表达变化。再对猪卵母细胞、中国仓鼠卵巢细胞 研究不同细胞的表达差异情况。为了进一步研究BMP-15和GDF-9的表达调控特性，我们从猪基因组中分别 粒，将报告载体分别转染CHO、C2C12和pAFSC细胞，检测上述基因的表达变化。 结果 ，5在卵巢组织的表达与其他组织的表达差异显著，并且仅在卵巢组织中表达，而GDF-9贝J]在多种组织中的 都有表达，这说明了两种重组质粒在CHO细胞中都具有生物活性，但BMP-15具有更强的表达特异性。 讨论 前期的研究表明，BMP-15和GDF-9均是卵母细胞发育起调控的关键基因，二者的表达具有组织特异 于卵巢上皮细胞，与卵母细胞的发育存在重要的联系。两个报告载体在CHO中可以启动EGFP的表达说明 它们均具有活性。实验室分离的pAFSC来源于孕中期猪羊水，研究表明它具有向神经细胞，脂肪细胞，跳 动样心肌细胞和生殖细胞样细胞等的分化潜能。猪羊水干细胞本身可表达GDF-9说明它具有向雌性生殖细 诱导分化类卵母细胞提供示踪材料，为体外生殖细胞发育的研究提供新的思路。 致谢 本研究由国家重点基础研究发展计划(973)项目(编号：2009CB941002)提供资助。 66