灵芝突变株G1502漆酶的分离纯化与酶学性质研究.pdfVIP

中国农业工程学会2007年学术年会论文集 灵芝突变株G1502 漆酶的分离纯化及酶学性质研究 1，2 2 王岁楼 ,孙君社 （1.中国药科大学食品科学与安全系，南京 210009 ；2. 中国农业大学食品学院，北京 100083 ） 摘 要：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分析发现，灵芝超高压突变株G1502 在发酵时只分泌一种漆酶。发酵液经透析浓缩、 -4 - 1 -6 DEAE-纤维素柱层析，比活提高 24.28 倍，酶活回收率 18.66%。以愈创木酚为底物时酶的Km= 1.94×10 mol·L ，Vmax=2.28×10 - 1 - 1 + 2+ 2+ 2+ 2+ + 2+ mol ·L ·min ；愈创木酚浓度高时对酶活有抑制作用。K 对酶有激活作用，Cu 激活作用不大，Fe 、Co 、Ca 、Na 、Ba 对酶活力 有抑制作用。 关键词：灵芝；漆酶；纯化；酶学性质 中图分类号：TQ920.1 0 引 言 养基、液体发酵培养基，均见文献[11]。 1.4 粗酶液制备 漆酶（Laccase）是一种含铜的多酚氧化酶，其作 发酵液经滤纸过滤，滤液即为粗酶液。酶活高时用 用底物广泛，能氧化多种酚和芳胺类化合物，在造纸、 测酶活的缓冲液适当稀释。 食品加工、废水处理、土壤净化、染料脱色、生物传感 1.5 酶活性测定[8，9] [1-6] 器、免疫检测等方面具有广泛的应用价值 。不同的应 在10 mL 反应混合液中，含8.5 mL 50 mmol/L 琥珀酸 用领域，对漆酶纯度要求不一样，如用于食品添加剂时， 钠缓冲液（pH 4.5），1 mL 40 mmol/L 愈创木酚和0.5 mL 必须符合食品添加剂的各项标准。若用于废水处理，则 粗酶液，30℃反应30 min 后，于465 nm 处测定吸光度 4 直接用菌丝即可，因为废水处理对酶的需求量大，而对 （465 nm 处愈创木酚的摩尔吸光系数ε = 1.21×10 465 酶的纯度要求不高。 mol-1 ·L ·cm-1 ），。以100℃加热灭活的酶液反应混合液 漆酶产量较高的微生物是担子菌中的白腐菌,但目 为对照。 [7-9 ] 前所报道的菌株其发酵周期都较长 ，研究最多的菌株 酶活力单位定义：1 min 内催化氧化1 nmol 愈创木 Trametes ver