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大会报告 荧光相关光谱与微流控芯片电泳联用研究 董朝青，任吉存＼＼／／ 上海交通大学化学化工学院 荧光相关光谱(FluorescenceCorrelation Spectroscopy，FCS)是新兴的一种单分子 检测技术。它通过测量高聚焦的检测微区内(通常小于lfL)荧光粒子由于自由扩散而产生 的荧光信号的涨落，并对这种荧光涨落信号进行相关函数分析，从而获得粒子的动力学参数 等信息。自从1993年Rigler等将激光共焦技术引入荧光相关光谱系统以来，荧光相关光谱 技术在生命科学和纳米科学等领域得到了广泛应用和快速发展[1]。 人们发现，在采用荧光自相关光谱(FCS)研究生物大分子间的相互作用时，通常要求 它们的分子量差别至少在6倍以上。这大大限制了它在生物大分子相互作用研究中的应用。 为了克服了这种局限性，1998年Orden和Keller利用毛细管电泳的分离特点，将其与荧光 行了测定[2]。并对两个分子量相差很小的生物大分子间的相互作用进行了研究，测定了单 荧光相关光谱的高聚焦的检测微区进行耦合时，弧形的毛细管通道会导致荧光自相关光谱的 聚焦检测区的光学变形，目前毛细管电泳与荧光相关光谱联用上进展缓慢。2000年Rigler 等提出将微流控芯片电泳通道与荧光相关光谱进行耦合，并采用FCS单分子技术对荧光分子 在微流控通道内部的流体动力学进行了研究[4]。 近年来，我们基于激光共聚构型构建了一套高灵敏的荧光相关光谱系统，成功地与微流控 芯片电泳联用，建立了多组分同时测定和荧光粒子表面电荷的测定的新方法[5，6]。 1．联用系统的构建 该系统主要由荧光相关光谱系统和微流控芯片毛细管电泳系统组成。微流控芯片毛细 管电泳系统主要包括一长度为25ram的单道的PDMS／盖玻片复合型芯片和一台高压电源(0—5 kV)组成。其中荧光相关光谱系统作为它的激光诱导光源，荧光信号收集系统和信号检测系 统使用 2．结果与讨论 2．1双组分测定分析 我们采用CE—FcS对不同浓度的罗丹明绿琥珀酸酯与荧光素混合溶液(摩尔浓度比分别 为1：9，1：1和3：7，其总浓度为lr$1)进行了双组分测定分析。实验中将罗丹明绿琥珀 酸酯与荧光素混合溶液注入芯片通道，然后在通道两端加上电场强度为800V／cm的电压，进 行荧光相关光谱实验。所得相关谱曲线(见图1)采用荧光相关光谱双组分有序扩散模型进行 拟合。测得三种不同浓度的罗丹明绿琥珀酸酯与荧光素混合物中罗丹明绿琥珀酸酯的浓度分 别为13±2％，55±2％和35±3％。 2．2量子点表面电荷的测定研究 当带电粒子在微流控芯片通道中在电场力作用下做有序扩散运动时，荧光相关光谱曲线 可以描述为： = (1) Gf ，L 、J ●一Ⅳ 一l ÷≮ 一㈦ 书]2 14 微流控芯片实验室进展 其中，是粒子在外力作用下穿越微区的时间，即r=o／vf。 另外，当荧光粒子在没有电渗流的通道中电泳迁移运动时其迁移速度与电场强度成正比： vFqE／( R) (2) 其中q是粒子表面电荷， 一溶液粘度，E一电场强度。 因此，根据以上关系可以推导出以下关系： 上=兰盟E(3) 百， 4七nD 图2为量子点在10删硼砂缓冲液(pHlO．O)中电泳时，在不同场强下的FCS相关曲线。根据 公式(3)，我们测得巯基丙酸为稳定剂的碲化镉量子点在pH8．4，9．3和10．0的TB缓冲 液中表面电荷分别为6．2±0．4，6．3±0．8和7．6±0．7。 O 0V，bn