胚胎体外培养新方法地研究.pdfVIP

第十二届全田动物繁殖学雍讨论会论文秦 胚胎体外培养新方法的研究 魏雁‘ (湖北省农科院生物技术研究所。武汉430072) 摘要：本实验针对Brinster的微滴覆盖法需要大量优质液体石蜡，处理繁杂，耗时费I等缺点，研 究出一种新的早期胚胎体外培养方法一套m法。该方法是利用多个器m进行套叠，形成一个相对稳 定的小环境．有利于早期胚胎的发育。 关键词：套m法，小鼠，胚胎，体外培养 哺乳动物早期胚胎的体外培养，无论是在阐 生化药业公司)、液体石蜡(Sigma)、№培养 明早期胚胎的发育机理和制作转基因动物等研 究领域．还是在生产领域为胚胎移植提供大量可 养皿(西安延河)、中35mm培养皿(Sigma)、拣卵 移植胚胎．都发挥着举足轻重的作用。目前，在 针(自制)、(302培养箱(日本)、实体显微镜(国 早期胚胎的体外培养中．广为使用是Brinster于 产)。 1963年铋用鲍液体石蜡覆盖微滴培养法(简称1．2胚胎的准备 微滴覆盖法)【1]。微滴覆盖法的特点在于：制作 选择5-6周龄、体重18--229之间的健康 微滴，可以减少培养液的体积。防止微滴水分蒸 雌性昆明小白鼠(购自湖北省疾病预防控制中 发，维持培养液正常渗透压，保证胚胎正常发育 的营养需要．同时防止因培养液过多而造成胚胎 注射HCGl0IU，与公鼠一对一合笼过夜配种。 发育过程中自身分泌的有益因子渗漏。使用该 次晨检查雌鼠是否有阴道栓，将有阴道栓小鼠 法培养胚胎常需要优质液体石蜡(无菌、无毒、无 (于注射HCG24～26小时后)颈部脱臼处死，无 水分、允许正常气体交换)，且在石蜡油的清洗 菌条件下分离出输卵管，并置于盛有lmlmz培 上，要求非常严格，要正式投入使用，需要一系列 养基的培养皿中，在实体显微镜下撕开膨大部， 繁杂的处理过程，耗时费工。鉴于此，本实验利 待卵丘细胞团完全流出后，立即把卵丘团用拣卵 用多个器皿进行套叠。形成一个相对稳定且有利 针移入含有0．3mg／rnl透明质酸酶的Ⅳ12培养 于胚胎正常发育的小环境，为早期胚胎体外培养 液中处理3～5分钟，待颗粒细胞完全脱落后，选 提供了一种新的方法。 发育较好的受精卵在Mz培养液中洗3～5次， 1材料和方法 最后在CZB中洗2～3次备用。 1．1试剂与器材 1．3套皿的制作及试验分组 PMSG(天津市华孚高新生物技术公司)、 取机80mm和妇Omm干净、无菌的玻璃培 HCG(南京动物激素厂)、透明质酸酶(上海第一 养皿各一个。在4180mm的培养皿中固定三个 1项目基金：国家“863”项目(2001AA216071)， 作者简介：魏雁(1974一)，女，湖北武汉人。研究实习员，主要从事胚胎生物技术研究。 李莉田永祥郑新民魏庆信赵永贞 第t-二届全国动物繁殖学术-i,．,-3--Ye-会Yd-文集 高约o3mm的塑料垫，并向该培养皿中注入与 皿，因其目的是改善胚胎培养环境，因而把他们 垫等高的蒸馏水．然后把+90rnrn培养皿置于垫称为调节皿，帕5mm的培养皿则用来制作微滴 子上．先后盖上培养皿盖。依上所述．准备两套。 培养胚胎，因而称为功能皿)，剩余的2#、48皿 直接置于培养箱中。这样将试验分成4个组， 取435mm干净、无菌的玻璃培养皿4个，并 在每个皿内制作数个50ul的微滴，然后将两个即：试验I组为单皿、微滴不盖液体石蜡；试验Ⅱ 组为单皿、微滴盖液体石蜡；试验Ⅲ组为套皿、微 皿(18、28皿)内的微