梅山和杜洛克猪中等卵泡之间差异表达基因的分离研究.pdfVIP

论文集 梅山与杜洛克猪中等卵泡之间差异表达基因的分离研究 黄涛1，赵志超1，杨飞‘，刘丽娟1，孙敬礼1，王宵燕2，宋成2，李大全1 1．石河子大学动物科技学院，石河子832003：2．扬州大学动物科技学院，扬州1225000 关键词：中等卵泡；差异表达基因；猪；梅山；杜洛克 引言 研究表明高排卵数母猪与低排卵数母猪的排卵数差异可能源于其卵泡发育动力学差异。高排卵数母猪 在卵泡期中后段可以维持一个更大的中等卵泡库，其卵泡期选择时段延长并能产生的更多的排卵前卵泡。 由于卵泡发育是受到众多基因的精确表达的精巧的生物学过程，解析其中的基因表达差异成为了解猪种间 繁殖力差异的重要一环。本研究试图从基因表达差异的角度来探讨猪种间排卵数差异的分子机理，为深入 研究影响猪排卵数量控制的分子机理和调控网络打下基础。 材料与方法 梅山与杜洛克经产母猪各6头，在发情周期第14天注射兽用氯前列烯醇，4天后屠宰取卵泡样，按直径分类 冻存。利用SMARTerTMPCRcDNFA cDNASubtraction SynthesisKit(C]onmch，USA)和PCR．SelectKit(Clontech， cDNA导入质粒载体，转化大肠杆菌，克隆后经蓝白斑鉴定和PCR鉴定，挑选阳性克隆测序。测序后对基 因进行BLASTLL对，选择部分基因设计引物用实时定量PCR技术验证表达差异。整理克隆到的基因，利用 html进行pathway分析，以了解基因的分类与功能。 结果 成功构建了梅山与杜洛克母猪中等M2卵泡之间 的正反向消减cDNA文库，消减效率达IzJ25倍。在梅 山消减库中获得148个非冗余ESTs，其中125个代表 己知基因，23个无同源基因；在杜洛克消减库中获 得75个非冗余ESTs，其中60个代表已知基因，15个 无同源基因。GO分析发现在185个已知基因中， 31个尚未被注释：己注释的差异基因主要涉及高分 子代谢过程调节、细胞周期、细胞生物合成的过程 调节、胞内运输、甾类激素刺激反应、胞内受体信 号通路、类固醇激素受体信号通路等。经pathway分 图1筛选的候选基因在梅山与杜洛克猪中等卵泡之间的相对表达量 析发现在TGF．．13通路富集了BAMBI、SKPl、 TCF4等8个基因在两猪种中等卵泡之间均为差异表达，其中7个达到显著水平。 讨论与结论 本研究分离到了在梅山与杜洛克猪卵泡期第4天中级卵泡之间差异表达基因225个，涉及代谢、细胞信 号、细胞周期、生物合成、运输、类固醇激素反应等方面。其中TGF．．B通路、卵母细胞减数分裂通路、类 固醇合成通路都有多个基因在两猪种中等卵泡中存在差异表达，可能是影响猪卵泡发育进而影响猪繁殖力 的重要原因。 致谢 本研究由国家自然科学基金资助。 45