仪器分析 教学课件 作者 王元兰 主编 张君枝 副主编 第12章 分子发光分析法.pptVIP

尚辅网 尚辅网 尚辅网 第三节 荧光和磷光分析仪 * 一、荧光分析仪器 利用荧光进行物质定性定量分析的仪器有荧光计和荧光分光光度计，由激发光源、单色器、样品池、检测器和信号记录系统五部分组成。荧光分析仪器有两个单色器，一个是激发单色器，置于样品池前，用于获得单色性较好的激发光；另一个是发射单色器，置于样品池和检测器之间，用于分出某一波长的荧光，消除其它杂散光干扰。 尚辅网 * 1. 光源 常用的光源是高压汞灯和氙弧灯。 2. 单色器 采用光栅作为单色器。 3. 样品池 用低荧光的石英材料制成，其形状是四面透光的方形。 4. 检测器 检测器位置与激发光成直角。荧光计采用光电管作检测器，荧光分光光度计采用光电倍增管（PMT）作为检测器。 尚辅网 * 二、 磷光分析仪器 由激发光源、单色器、样品池、检测器和信号记录系统五部分组成。 1. 样品室 测定低温磷光一般在液氮温度(77K)下进行，盛放试液的样品池需放置在盛液氮的杜瓦瓶内。固体表面室温磷光分析则需特制的样品室。 2. 磷光镜 有些物质既产生荧光，又能产生磷光。为了在有荧光现象的体系中测定磷光，常采用一种叫磷光镜的机械切光装置，利用荧光与磷光寿命的差异消除荧光干扰。 尚辅网 第四节 荧光分析法和磷光分析法的特点与应用 * 一、荧光和磷光分析法的特点 1. 荧光分析方法的优点 (1)灵敏度高 (2)选择性强 (3)提供比较多的物理参数 2. 磷光分析方法的特点 （1）磷光辐射的波长比荧光长 （2）磷光的寿命比荧光长 尚辅网 二、荧光分析法和磷光分析法的应用 * 1. 荧光分析法的应用 很多无机离子能与具有π电子共轭结构的有机化合物形成荧光配合物，故可用荧光法测定。目前采用有机试剂进行荧光分析的元素已近70种，其中较常采用荧光法测定的元素有铍、铝、硼、镓、硒、镁、锌、镉及某些稀土元素等。 2. 磷光分析法的应用 磷光分析法在药物分析、临床分析及环境分析领域得到了一定的应用。它与荧光法互相补充，已成为痕量有机物分析的重要手段。 3. 联用技术的检测器 尚辅网 第五节 化学发光分析法 * 吸收化学能使分子发光的过程称为化学发光。化学发光分析是利用某些化学反应所产生的光发射现象而建立的一种分析方法。 一、概述 该方法已经广泛应用于生物科学、食品科学、药物检测、环境监测、农林科研等领域，可以测定数十种元素、大量无机物质和有机化合物。 尚辅网 * 二、基本原理 principle 1. 化学发光反应 在化学反应过程中，某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。 A +B = C + D* D* → D + h? （1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物； （2）化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ?E=170～300 kJ/mol；位于可见光区； （3）发光持续时间较长，反应持续进行； 化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光(bioluminescence)。 尚辅网 * 2.化学发光效率 化学效率： 发光效率： 时刻t 的化学发光强度(单位时间发射的光量子数)： dc/dt 分析物参加反应的速率； 尚辅网 * 3.化学发光强度与化学发光分析的依据 在化学发光分析中，被分析物相对于发光试剂小得多，对于一级动力学反应： dc/dt =Kc； K 为反应速率常数。 定性依据： （1）在一定条件下，峰值光强度与被测物浓度成线性； （2）在一定条件下，曲线下面积为发光总强度(S)，其与被测物浓度成线性： 尚辅网 * 4.化学发光反应的类型 （1）气相化学发光反应 a. 一氧化氮与O3的发光反应 NO + O3 → NO2* NO2* → NO2 + h? 发射的光谱范围：600～875nm，灵敏度1ng/cm-3； b.氧原子与SO2、NO、CO的发光反应 O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） SO2 + O + O → SO2* + O2 SO2 * → SO2* + h? 最大发射波长：200nm；灵敏度1ng/cm-3； 尚辅网 * O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） NO + O → NO2* NO2 * → NO2 + h? 发射光