仪器分析 教学课件 作者 张威 主编 第六章 荧光分析法.pptVIP

尚辅网 尚辅网 第六章 荧光分析法 学习目标 1.熟悉分子荧光（磷光）发生的机理； 2.熟悉分子荧光与分子结构及环境的关系； 3.了解激发光谱与荧光光谱及其关系； 4.掌握荧光分析法的应用。 引言：何为光致发光？ 有些物质受到激发光照射后会发射出波长比激发光更长（能量亦较低）的光，这种发光称为光致发光，如荧光表、荧光显微镜、荧光矿石，等。 光致发光依发光条件不同又分为荧光和磷光两类，这就是本章学习的内容！ 主要内容 §6.1 基本原理 §6.2 荧光光度计 §6.3 荧光分析方法 §6.1 基本原理 一、分子荧光和磷光的产生 一、分子荧光和磷光的产生 分子的去激发 二、激发光谱、荧光光谱 激发光谱：确定荧光波长不变，连续改变激发光波长，以激发光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作出的图即激发光谱。 激发光谱 二、激发光谱、荧光光谱 荧光光谱：以确定波长和强度的激发光照射荧光物质，连续测定不同波长的荧光强度，以荧光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作出的图即荧光（发射）光谱。 荧光光谱 二、激发光谱、荧光光谱 三、荧光强度和浓度的关系 （一）荧光效率 三、荧光强度和浓度的关系 （二）荧光强度和浓度的关系 ：荧光强度 ：荧光效率 ：吸收光强度 三、荧光强度和浓度的关系 （二）荧光强度和浓度的关系 对于稀溶液，由郎伯-比尔定律可导出 一定条件下，上式可简化为： 该式是荧光分析法用于定量的基础 四、影响荧光强度的因素 （一）分子结构 1.跃迁类型 能够发射荧光的物质首先要能够吸收紫外-可见光线 π-π*跃迁的吸光系数较高，也是产生荧光的主要跃迁类型 （一）分子结构 2.共轭效应 体系共轭程度越高，荧光效率越高 =0.11 =0.29 （一）分子结构 3.刚性结构和平面效应 （一）分子结构 4.取代基效应 给电子基团如-OCH3,-OH,-NH2等使共轭体系增大，增强荧光； 吸电子基团如-NO2 ,-COOH等减弱荧光； 卤素等重原子取代基会使荧光减弱，磷光增强。 （二）环境作用 1.温度 温度升高，分子碰撞几率增加， 荧光效率降低 温度降低，分子碰撞几率减少， 荧光效率增大 （二）环境作用 2.溶剂 溶剂极性增大，π-π*跃迁所需能量降低，荧光增强； 溶剂粘性增大，分子碰撞概率降低，荧光增强。 （二）环境作用 3.pH值 荧光物质为弱酸或弱碱时，溶剂的酸度对其荧光有较大影响，例： 无荧光 蓝色荧光 无荧光 （二）环境作用 4.荧光猝灭剂 可使荧光物质的荧光效率降低，荧光强度降低的物质称为荧光猝灭剂。 如溶剂中的杂质，氧分子，卤素离子，重金属离子等 （二）环境作用 5.瑞利散射光和拉曼光 §6.2 荧光光度计 §6.2 荧光光度计 荧光分光光度计是最常用的荧光光度计，由以下几个构件组成： §6.2 荧光光度计 1.激发光源 常用氙灯和高压汞灯，有新式仪器用溴钨灯和激光等作为光源 §6.2 荧光光度计 2.单色器 有两个单色器： 激发单色器 ：用以选择合适的激发光 荧光单色器 ：除去干扰测定的其他荧光，散射光和杂质所产生光 §6.2 荧光光度计 3.样品池 常用石英等低荧光材料制成 4.检测器 由光电倍增管构成，对信号的灵敏度较高； 荧光光度计中，激发光源的光路与 荧光光源的光路是 相互垂直的 §6.3 荧光分析方法 §6.3 荧光分析方法 标准曲线法 将已知量的标准物质与试样在相同条件下处理，配制一系列标准液，测定它们的相对发光强度。 以相对荧光强度为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标。 浓度 C1 C2 C3 C4 C5 Cx 荧光强度 F1 F2 F3 F4 F5 Fx 标准比较法 如果试样数量不多，可用比较法进行测量。 配一标准溶液浓度为Cs， Cs与未知液浓度Cx相近，并在相同条件下测定它们的荧光强度： 未知液 Fx = KCx 标准液 Fs = KCs 1.下列（ ）去激发过程属于辐射跃迁 2.下列（ ）