仪器分析 教学课件 作者 张威 主编 第八章 色谱分析法导论.pptVIP

尚辅网 尚辅网 第八章 色谱分析法导论 学习目标 理解色谱分离的基本原理，了解色谱的分类方法 掌握色谱流出曲线所代表的各种技术参数的准确含义 掌握色谱分离的理论基础：塔板理论和速率理论方程 学会各种色谱定性和定量的分析方法 主要内容 §8-1 色谱分析法及其基本概念 §8-2 色谱分析法基本理论 §8-3 色谱分析法定性和定量分析方法 §8-1 色谱分析法及其基本概念 一、色谱分析法的产生和发展 二、色谱分析法分类 三、色谱图及常用术语 一、色谱分析法的产生和发展 二、色谱分析法分类 三、色谱图及常用术语 （一）色谱图 （产生过程演示） 色谱图产生过程 （二）基本术语 1.基线 2.色谱峰 3.保留值 死时间t0 ；保留时间tR ；调整保留时间tR 死体积V0 ；保留体积VR ；调整保留体积VR 4.分配系数K和分配比k 基 线 1.基线：在正常实验操作条件下，色谱柱后仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值。 色谱峰 2.色谱峰 组分流出时，检测器对该组分的响应信号随时间变化形成的峰形曲线，正常的色谱峰为对称的正态分布曲线。 死时间t0 不能被固定相吸附或溶解的组分从进样开始流经色谱柱到出现峰最大值所需要的时间为死时间，亦即流动相到达检测器所需的时间。 例如气相色谱中惰性气体（空气、甲烷等）流出色谱柱所需的时间就是死时间。 保留时间tR 组分从进样开始到色谱峰顶点对应的时间间隔称为该组分的保留时间。 当操作条件不变时，组分的tR为定值，因此保留时间是色谱法的基本定性参数。 调整保留时间tR 扣除了死时间后的保留时间，即t‘R= tR- t0。 调整保留时间tR体现的是组分在柱中被吸附或溶解的时间。因其扣除了与组分性质无关的t0，所以作为定性指标比保留时间tR更合理。 死体积V0 不能被固定相滞留的组分从进样到出现峰最大值所消耗的流动相的体积。也可以说死体积V0是从进样器到检测器的流路中未被固定相占有的空隙的总体积。 死时间相当于载气充满死体积所需的时间。死体积大，色谱峰扩张(展宽)，柱效降低。 保留体积VR 是指组分从进样开始到出现峰最大值时所需流动相的体积。一般可用保留时间乘载气流速求得：VR = tR?F0 (F0为载气流速) 调整保留体积VR 保留体积扣除死体积后的体积称为调整保留体积，它真实地反应将待测组分从固定相中携带出柱子所需流动相体积。 VR = tR?F0 调整保留体积和调整保留时间同属于色谱定性参数。 分配系数K和分配比k （1）分配系数K （2）分配比k §8-2 色谱分析法基本理论 一、塔板理论 二、速率理论 三、色谱分离总效能的衡量 塔板理论 若色谱柱的总长度为L，塔板高度为H，则色谱柱中塔板数n为： 塔板数与色谱参数的关系为： 塔板理论 有效理论塔板数n有效： 对应理论塔板高度H，有效塔板高度H有效： 塔板理论 塔板理论是基于热力学近似的理论 在解释流出曲线的形状、浓度极大值的位置及评价柱效等方面是成功的； 但由于它的某些假设与实际色谱过程并不相符，因而不能很好地解释与动力学过程相关的一些现象，如色谱峰峰型的变形、理论塔板数与流动相流速的关系等。 二、速率理论 范第姆特方程式: 式中H为理论塔板高度；u为流动相的线速度(cm/s) ；A为涡流扩散项；B/u为分子扩散项；C · u为传质阻力项，该函数图可看出柱效与流速u的关系。 其中dp表示固定相的平均粒径大小；λ为填充不规则因子 固定相颗粒越小，dp越小，填充的越均匀，A越小，H越小，柱效n越高 分子扩散项（纵向扩散项）B/u 因分子运动时，会自发发奋扩散运动，导致谱带变宽。 分子扩散项（纵向扩散项）B/u 其中γ是弯曲因子，表示填充柱内流动相扩散路径弯曲的因素，一般填充柱色谱的γ1 D为组分在流动相中扩散系数（cm2·s-1） D = Dl + Dg ≈ Dg 传质阻力项C?u 流动相的传质阻力： 要减小流动相的传质阻力，就可以采用细小（dp小）的固定相、扩散系数D大（相对分子质量小）的流动相以提高柱效 传质阻力项C?u 固定相的传质阻力： 降低固定液液膜厚度（df）可以减小传质阻力系数。在能完全覆盖载体表面的前提下，可适当减少固定液的用量（但固定液也不能太少，否则会缩短柱寿命）。 增加温度有利于增加Ds，减小传质阻力 柱效与流速的关系 三、色谱分离总效能的衡量 1、柱效能和选择性 2、分离度 R 3、分离度与柱效、选择性的关系 1、柱效能和选择性 柱效能：是指色谱柱在分离过程中的分离效能，常用n（或n 有效）、H来描述。 选择性：常用色谱图上两峰间的距离衡量色谱柱的选择性，其距离越大说明柱子的选择性越好。一般用相对保留值表示: