仪器分析 教学课件 作者 王元兰 主编 张君枝 副主编 第6章 高效液相色谱法.pptVIP

尚辅网 尚辅网 尚辅网 * 应用及特点： 液-固色谱法适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样对具有不同官能团的化合物和异构体具有较高的选择性。 缺点： 由于非线性等温吸附常引起拖尾现象。 尚辅网 * 三、离子对色谱法 离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 ) 加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。 其原理可用下式表示： X+水相 + Y-水相 === X+Y-有机相 式中： X+水相 --流动相中待分离的有机离子）； Y-水相 --流动相中带相反电荷的对离子（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）； X+Y-有机相---形成的离子对化合物。 尚辅网 * 当达平衡时： KXY = X+Y-有机相/[ X+]水相[Y-]水相 根据定义，分配系数为： DX= = X+Y-有机相 /[ X+]水相 = KXY [Y-]水相 离子对色谱法(特别是反相)发解决了以往难以分离的混合物的分离问题，诸如酸、碱和离子、非离子混合物，特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。 尚辅网 * 四、离子交换色谱法 IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。 以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下： X -(溶剂中) + (树脂-R4N+Cl-)=== (树脂-R4N+ X-) + Cl- (溶剂中) 当交换达平衡时： KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-] 分配系数为： DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-] [讨论：DX与保留值的关系] 尚辅网 * 五、空间排阻色谱法 以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径（x nm~x00 nm）的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。 机理：当试样进入凝胶色谱柱时，尺寸过大的分子完全不能渗透到胶孔中去而受到排阻，沿胶粒之间的间隙直接流出色谱柱，产生一个色谱峰；尺寸过小的分子可完全渗透到胶孔中去，流动速度慢，最后流出色谱柱，产生一个色谱峰；中等尺寸的分子 ，以其大小的不同，可渗透到某些孔穴而不能进入另一些空穴，流出速度取决于分子尺寸的大小, 按分子尺寸由大到小的顺序先后流出色谱柱，从而实现分离。 应用：适合分离分子量大的化合物（100~800,000)，只要相对分子量相差大于10%。 尚辅网 * 六、离子色谱法 原理： 用离子交换树脂为固定相，电解质溶液为流动相。 以阴离子交换树脂(R-OH)作固定相，分离阴离子(如Br-)为例。当待测阴离子Br-随流动相(NaOH)进入色谱柱时，发生如下交换反应(洗脱反应为交换反应的，的逆过程)： 以电导检测器为通用检测器，为消除流动相中强电解质背景离子对电导检测器的干扰，设置了抑制柱。试样组分在分离柱和抑制柱上的反应原理与离子交换色谱法相同。 尚辅网 * 尚辅网 * 离子色谱具有以下优点： （1）分析速度快 可在数分钟内完成一个试样的分析； （2）分离能力高 在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物分离；例：使用双柱法，在十几分钟内，可使七种阴离子完全分离。 （3）分离混合阴离子的最有效方法 （4）仪器流路采用全塑件，玻璃柱，耐腐蚀 尚辅网 * 离子色谱的应用 阴离子分析: 双柱；薄壳型阴离子交换树脂分离柱(3×250mm), 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3，流量138 mL/h 七种阴离子在20分钟内基本上得到完全分离，各组分含量在3～50 ppm。 离子色谱主要用于测定各种离子的含量，特别适于测定水溶液中低浓度的阴离子。 尚辅网 * 第五节 高效液相色谱法的应用 一、 在生物化学和生物工程中的应用 HPLC技术在生化领域的应用主要集中于两个方面： ①低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定； ②高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。 尚辅网 * 二、在医药研究中的应用