不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞免疫生物学特性的影响.pdfVIP

中文摘要 不同IL．15基因转染对NCI．H446细胞免疫生物学 特性的影响 摘 要 ．厂 目的：肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大疾病，免疫功能与肿瘤的 发生发展密切相关。随着对肿瘤发生、发展和治疗的研究，尤其是细胞与 I 分子水平的研究逐步深入，转染抗瘤相关细胞因子基因，已成为探索肿瘤 有许多重叠生物活性的细胞因子；是能显著提高CD8+CTL细胞和NK细 胞增殖和杀瘤活性，而备受关注的抗瘤细胞因子。虽然已有一些关于IL．15 基因转染肿瘤细胞对其在动物体内成瘤影响的报道，但原型IL．15基因转 染的研究未达到预期的抗瘤效果，曾怀疑是其长信号肽影响分泌所致；转 染促其分泌信号肽的改型IL．15基因研究也未达到预期结果。由于己知： CD8+CTL杀瘤识别的抗原，需要肿瘤细胞表面的ⅧAI类分子提呈； CD8+CTL的杀瘤功能活化，需要肿瘤细胞表面mAII类分子提呈抗原激 活的CD4+Th细胞辅助；NK细胞杀瘤，需要肿瘤细胞对其杀伤敏感；肿 }玎二AI类和II类分子表达。为此，本研究在已成功构建三种不同IL．15基 芝 NCI．H446细胞的札A ’， 性、诱导T细胞杀瘤和IFN吖分泌的影响，从基因转染对肿瘤细胞免疫生 t 物学特性改变的角度，揭示其肿瘤免疫的意义，为IL．15基因转染的抗瘤 研究提供新的实验和理论依据。 方法： l 对NCI—H446细胞的ⅧA I类和II类分子表达(直接免疫荧光FCM 法)及对NK杀伤敏感性(MTT法)的影响。 2在有或无实验选定无独立诱导PBMC增殖作用剂量IL．2存在下，分别 中文摘要 将丝裂霉素处理的三种基因转染细胞TC(MTC)和丝裂霉素处理的 WC(MWC)，与PBMC共培养(各组体积均为2mL)：直接细胞计数 取直接计数和荧光阳性细胞百分比改变，与同步相应对照相比有显著 。＼． 差异的被刺激增殖的PBMC，MTT法测定其对WC和各TC的杀伤率。 、 3 ， WC和各TC中MICA的mRNA表达。 结果： 1不同IL．15基因转染对NCI．H446细胞表面HLAI类和II类分子表达 的影响 WC表面}Ⅱ二AI类和II类分子表达阳性率分别为(35．52士4．02)％和 别提高为(49．53士1．88)％和(72．98士O．88)％。 2不同IL．15基因转染对NCI．H446细胞NK杀伤敏感性的影响 ％。 3不同IL．15基因转染对NCI．H446细胞诱导PBMC增殖的影响 (20 ’ ■ 养过程中的细胞浓度变化无显著差异：3天时分别为(O．93±O．06)× U／mL的IL．2不 ×105／nlL和(O．67±O．06、)×105／mL(PO．05)；表明20 能单独诱导PBMC增殖，为选定无独立诱导PBMC增殖作用IL一