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广东汉族人细胞因子基因多态性研究 廖宝平、孙筱放、潘情莹、周华、吴学诗 广州医学院附属广州市第二人民医院 妇产科研究室 摘要： 目的：探讨细胞因子基因多态性分布。方法：采用PCR-SSP对58名随机人群的肿瘤坏死 因子、转化生长因子、IL-6、IL．10、干扰索等细胞因子分别作基因多态性研究。结果：肿瘤坏 扰素三个基因型频率分别是O．55l、0．310、0．138，等位基园频率A=o．707、T=0．293。 结论：本组数据对细胞因子基因多态性研究有助于从分子水平去认识细胞因子在机体免疫调节 的重要作用，对临床上某些疾病发病机理的研究、诊断和防治提供有力的依据。 关键词：细胞因子基因型等位基因 细胞因子(Cytokines)由活化的免疫细胞(包括淋巴细胞和非淋巴细胞)和某些基质细 胞产生．是介导细胞增殖、分化，产生功能和维持生存的细胞间信号分子。绝大多数细胞因子 的编码基因只有一个．仅干扰索(IFN-Y)为多基因产物。各种细胞因子的基因定位不一，肿 因紧密相连。IL-IO位于第5号染色体长臂。大多数细胞因子基因为单拷贝基因(IFN．丫除 外)，它们由4～5个外显子和3～4个内含子组成。在细胞因子基因5’端含启动序列、增强子 序列及一些调控序列，在3’端非编码区往往吉有重复的TAAT序列，可使细胞因子mRNA的 半衰期缩短．从而控制细胞因子的表达，使其发挥短暂性和局部性的效应。细胞因子的合成、 分泌和生物学效应受细胞因子基因的调控。合成量个体差异根大，有的可相差10倍以上。差 别的主要原因是细胞因子基因型的变异及基因调节区或房动区的多态性。多数细胞因子为小分 子多肽．分子量不超过60KD，多由100个左右的氨基酸组成．不同细胞园子之间无明显的氨 基酸序列的同源性。他们在免疫系统中起着非常重要的调控作用，在异常情况下也会导致病理 反应。为探讨细胞因子等位基因多态性在人群的分布，本文采用PCR-SSP方法对64名广东籍 下。 1．材料与方法 1．1样本 随机选择58名来自医院儿科体检的广东藉汉族健康个体，年龄2岁～12岁．男性 40人-女性18人。身体健康，三大常规正常，无感染。他们之间均无血缘关系。 1．2测定步骤 取新鲜全血0．3 u m1．按常规方法提取DNA。调整DNA浓度为0．05,--0．2 9 ／¨l·将DNA模扳391M、Taq酶12iu和细胞圈子引物D．MIX(美国One Lambda， huc．提供试剂盒)混合后加到细胞因子试剂板上，用美国PE公司9700型PCR仪扩 SSP胶电泳仪电泳5分钟．照相。 1．3结果观察 根据试剂盒所提供五项细胞因子分布格局表，分折电泳带阳性结果，确定等位基因。 (轰1) 细腿因壬盆壶搔屈轰 表中A、G、c、T分别指腺嘌吟脱氧核苷酸、鸟嘌畸脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷 酸、及胸腺嘧啶脱氧核苷酸。 1．肿瘤坏死因子n(TNF—q)基因启动子上一308位点A／G变换会直接影响转录因子与 该序列DNA的结台。导致细胞因子合成量分泌高或低。 录园子与该序列DNA的结合。导致细胞园子合成量分泌高或低。 A，G，-819TIC，-592AJC。 3．IL-10基因启动子的变换位点是-1082 C／G。 4．儿-6基因启动子的变换位点是一174 T，A。 5．干扰素(IFN—Y)基因启动子的变换位点是+874 1．4统计学处理 用统计学计算出本组人群各种细胞因子基因型的频率和等位基因频率，然后经 Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验，表明各基因型频率已选遗