大豆苷元对去卵巢老龄大鼠骨生物力学影响的研究.pdfVIP

营养与健康促进论坛 Daizein对成骨细胞内钙离子浓度的影响，一方面可能是Daizein影响细胞膜上的电位，开 启了钙通道：另一方面，也可能是因为Daizein与膜上受体结合从而开启了钙通道，钙离子内 流浓度上升。同时，钙离子浓度上升也不排除Daizein作用于细胞使得内贮存钙释放的可能，细 胞内游离钙主要贮存在内质网和肌浆中，有三磷酸肌醇敏感钙池和三磷酸不敏感钙池两类。因此， 还有待丁．离子通道阻断实验来进一步确认。 3．3大鼠成骨细胞原代培养 对于成骨细胞的培养有两种培养方法：组织块培养法“”和酶消化法““…。酶消化法的优点 是可以获得大量的细胞，但是操作比较复杂又容易被污染，消化时间不易确定，并且酶处理后对 细胞膜表面受体和抗原成分有影响，影响了培养细胞的贴壁和成活率。组织块培养法简单，方便， 分离所得的细胞也比较纯，但是它的产山量比较低，其技术还有待于进一步改进。冈此，本实验 在首先去除骨外膜成纤维细胞系保养的基础上，采用酶法与组织块培养相结合的方法，两次酶消 化除去成纤维细胞，破骨细胞等，并松懈成骨细胞，然后利用成骨细胞具有游走的特性，分离成 骨细胞。 Peck和Brige””在二十世纪六十年代运用胶原酶消化骨片，体外培养成骨细胞成功，之后 Wong等采用多次酶消化法使得分离山的细胞更加纯化，本实验运用上述方法的原理并对它进行 改良，使用更加便宜的胰蛋白酶替代胶原酶消化，胰蛋白酶仅能消化骨小梁表面细胞周围的基质， 而对于埋藏于骨基质中的大量静ll骨细胞无作用，有研究证实骨组织中各种细胞耐受消化酶能力 依次为成纤维细胞，破骨细胞，骨生成细胞，成骨细胞的顺序而依次增强，因此成纤维细胞，破 骨细胞，骨生成细胞在第一次消化过程中首先脱落，再次消化可收集到脚纯净的人鼠成骨细胞． 本实验细胞贴壁密度很低，据分析可能是在消化过程中没有控制好胰蛋白酶的消化时间．导 致成骨细胞也被消化液消化，关于成骨细胞原代培养的条件还有待于进一步的实验摸索。 4结论 大鼠成骨细胞在下列分离条件：用2毫升0．25％胰酶37℃消化lc一骨粒5min．再对剩余骨粒 较大。用Fluo-3标记细胞，共聚焦显微镜下可见Daizein能干涉成骨细胞内钙离子浓度的变化。 在此法基础上．可以采用组织块培养与酶法相结合的方法，改进相关条件建立大鼠成骨细胞培养 方法，以用于研究与骨形成相关的成骨细胞功能，揭示大豆异黄酮对骨质疏松症预防机制。 大豆苷元对去卵巢老龄大鼠骨生物力学影响的研究 张秭汤丹唐舒琴金邦荃+ (南京师范大学食品科学与营养系南京210097) 人豆苷元具有许多重要的生理活性，如抗氧化、改善心血管及骨质疏松等临床症状。它与人 体分泌的雌激素在结构上相似．具有类雌激素活性，是近年人们研究替代雌激素功效的熟点之一 n．2]。骨生物力学研究有助丁．对骨质量进行直接评价。三点弯曲实验适宜于人鼠长骨力学性能 的测定，结构力学指标包括最人荷载、最人桡度、弹性载荷、弹性桡度和能量吸收等[3]。本实 营养与健康促进论坛 验对3月龄去卵巢大鼠连续灌胃6月，9月龄宰杀后取右侧股骨，进行三点弯曲实验，研究骨组 织在外力作用下的力学特性和骨受力后的生物效应，探讨不同剂量大豆苷元对去卵巢老年太鼠骨 骼强度的影响。 l材料和方法 1．1实验动物与分组：60只3月龄清洁级SD(SpragueDawley)雌性大鼠，平均入试体重为 (ovX—现)、去卵巢+lOOmg／kg大豆苷元组(ovx—n)。 I．2骨质疏松模型建立：采用背驼式去卵巢术去除3月龄大鼠双侧卵巢。备毛、消毒、腹腔戊巴 比妥钠(4mg／lOOmg体重剂量)麻醉，于无菌手术室手术。术后禁水6小时，禁食12小时，在 无菌室内观察手术效果和成活率． 1．3灌胃处理：术后恢复1周，称量体重，按体重计算灌胃剂量．连续6月。除0vx组灌服等 剂量蒸馏水外，其它四组分别按体重设计灌服一定剂量大豆菅元(如上1．1所示)。灌服液均由 大豆苷元溶于蒸馏水中配制而成。98％大豆苷元，白色结晶粉末，购自河北宣化化工厂． 1．4股骨样本制各：大鼠喂养6月后处死，取股骨．剔除骨表面的肌肉等软组织，称鲜重，4℃ 箱过夜待测生物力学指标。 1．5骨生物力学测定方法和仪器 1．5．1仪器：游标片尺测量般骨中段外径和骨长，精确度0．02ram(图1)． qTs质构仪(QqS25Texture