三七和其提取物的指纹图谱研究.pdfVIP

全国生物医药色谱学术交流会(2008)论文集 D42三七及其提取物的指纹图谱研究 崔翰明彭亮林海程慧平 中国中医科学院广安门医院，北京市宣武区北线阁5号，100053 摘要，目的优化三七及其提取物的HPLC指纹图谱分析方法，并建立控制三七药材和总皂苷 提取物的指纹图谱标准。方法采用Kromasil Clg(250x4．6mm，5／且m)色谱柱；以不周比例乙 腈和水(v／v)线性梯度洗脱；流速：lmL．min～；柱温：30℃；检测波长：203rim；进样量： 20皿。三七不同药用部位(主根、荆条(支根)、剪口(根茎)、叶、花)和总皂苷提取物采 用甲醇超声提取，按上述HPLC指纹图谱测定方法进行分析，并用标准品和HPLC／MS对部分 色谱峰进行鉴定。结果在80min的色谱图中，三七不同药用部位共分离得到13个共有峰， l№2、峰6为Rc、峰7为Rd。三七不同药用部位的指纹图谱各峰的峰面积和比例有比较明显 地差异。对10批三七剪口总皂苷提取物进行分析，发现各批差别较小。结论本方法简便、 准确，重现性良好，可用于准确分辨三七不同药用部位，本标准可用于药材和提取物的质量 控制。 关键词；三七，HPLC，指纹图谱，三七总皂苷 1．仪器与试药 。 UV 德国Knaver二元高压泵、KnaverDetecter；Kromasil C18色谱柱(250x4．6mm，59in， 100A)；C18固相萃取小柱。三七主根、荆条(支根)、剪口(根茎)、叶、花均采自云南文山： 三七提取物由本实验室制备；三七对照药材及所用对照品均购自中国药品生物制品检定所； 甲醇、乙腈(Fisher试剂公司)，高纯水(Milliq超纯水机，18．2MQ)。 2．方法与结果 2．1色谱条件 色谱柱：Kromasil 线性梯度洗脱(v／v)，比例见表l：流速：lmL·min～；柱温：30℃：检测波长：203nm。进样 量：20皿。 表1：乙腈(A)：水(B)流动相梯度表(v／v) 时闯 0min 5rain 20m．in 45min50min60n3Jn 70rain 乙腈(A) 5％ 20％ 36％ 80％ 100％ 100％ 5％ 水(B) 95％ 80％ 64％ 20％ 0％ 0％ 95％ 2．2供试样品的制备 参考文献方法【l。】，三七各药用部位分别采用甲醇超声或回流提取，不同浓度乙醇(60、 70、80、95％)超声或回流提取，60、70、80％乙醇回流提取液c18固相萃取等方法制备供试 液。分别取上述供试液20此进样，记录色谱图。其中甲醇超声供试液所得图谱出峰多，主要 峰特征性强，多数峰分离度好，样品制备方法简单、谁确，重现性好，达到HPLC指纹图谱 要求，其结果见图l。采用标准品对照和HPLC／MS对主要色谱峰进行鉴别，共判定出峰1为 Rc、峰7为Rd。 本课题所有供试液的制备均采用甲醇超声提取方法。方法：精密称取药材粗粉起，置于 全国生物医药色谱学术交流会(2008)论文集 温，补充损失的溶剂至恒重，过滤，取滤液，50℃减压旋转蒸发至干，精密加入40ffd甲醇溶 解残渣，溶液用微孔滤膜(O．45urn)滤过，即得样品液。 ． O 二LO 30 40 50 60 70 ：主：髓‘馨in， ’ 图1．三七主根甲醇超声提取液HPLC图谱 2．3方法稳定性实验 精密吸取同一批三七主根制备的供试品溶液、分别在放置0、12、24、36、48、60、72 小时后按照2．1色谱条件测定指纹图谱。选择三七中的特征成分三七皂苷Rl为参照峰(峰号 1。S峰)，分析所得图谱中S峰(三七皂苷R1)