肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株在Vero细胞上的适应传代和其抗原性研究.pdfVIP

估计其中包含了隐性感染的因素。 3．5麻疹疫曲的应用，使麻疹的预防与控制工作进入了一个新阶段，人们对麻疹这‘疾病从被动预防转 入了主动控制，并已看到了通过免疫预防控制麻疹的希望。1996年，世界卫生组织对通过接种疫苗控制麻 疹这一课题进行了讨论。而定期开展人群麻疹抗体水平监测，可以动态地掌握不同年龄的人群对麻疹的易 感性，还可作为疫情预测预报的参考。监测数据对麻疹疫苗接利-的效益评估也具有一定指导意义，同时还 可为制定疾病预防控制措施提供科学的依据。 肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株在Vero细胞上的适应 传代及其抗原性研究 浙江省疾病预防控制中心病毒研究所浙江省肾综合征出血热重点实验宰 姚苹苹徐芳朱函坪朱智勇(指导) 【摘要】目的将肾综合征出血热疫茁后备毒株适应于Vero细胞，观察病变情况，并对其抗原性和繁 细胞的病变情况，同时将传代后的病毒接种敏感动物，观察动物的发病情况和毒株的繁殖特性。结果经过 5次连续传代，四株病毒在Vero细胞上均显示出良好的适应性，从第二代开始病毒滴度稳定在6．00Lg ZJ7株抗原量 TCID；。／ml以上，第五代时最高达7．50LgTCID，。／ml，第三代毒株抗原量均已达到1：128， 最高时达1：768，四株毒株感染Vero细胞，连续观察12天不见细胞产牛病变，第五代细胞病毒液接科t 敏感动物，9天后动物发病甚至死亡。结论四株病毒巳适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高、毒力强和抗 原性良好的特性，是Vero细胞肾综合征出血热灭活疫苗良好的后备筛选毒株。 【关键词1 汉坦病毒疫苗细胞培养抗原性 肾综合征出血热(HFRS)是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病。我国占全球发病总数的90％，病 死率约为3％一lO％，波及全国30个省市和自治区。在各种预防HFRS的措施中，疫苗是一种最特异和最有 I型、Ⅱ型和双价沙鼠肾灭活疫苗，经现场流行病 效的预防手段。迄今为止，本实验室已经研究出HFRS 学考核， 疫区人群的保护率在95％上，为预防HFRS起到了重要的作用，但疫苗的毒种ZlO(I型)和 较大的变化，这预示着引起该病的病毒有可能发生变异。因此，必须选择疫醢的后备毒株，一旦发生目前 疫苗保护率不高或不能保护时，即可用后备毒株来生产疫苗。2001—2002年我们从浙江省的HFRS疫区鼠 肺中分离到了9株HFRS病毒，筛选出病毒滴度较高、抗原性较好的3株I型和l株Ⅱ型毒株，并将4株毒 株适应于Vero细胞，观察病变情况，并对其抗原性作了研究，将传代后的病毒攻击敏感动物，观察动物的 发病死亡情况。 1材料与方法 1．1 均由中国药品生物制品检定所惠赠，经本室传代保存，Vero使用代次不超过 Vero和Vefo—E6细胞 150代，Vero—E6使用代次为30—60代之间。 1．2ZJ2．zJ4．zJ7(野鼠型)和ZJ5(家鼠型)毒株采用20天左右沙鼠分离自浙江省IIFRS疫区 铺获的野外鼠鼠肺标本(分别在乳沙鼠脑传8、8、5、7代)，经I型、II型汉坦病毒单克隆荧光抗体，37℃水 浴30’，利用荧光显微镜鉴定型别。 1．3沙鼠和乳沙鼠 出生20天左右的沙鼠和2—5天龄的乳沙鼠系本实验室饲养。 一238— 1．4试剂HFRS荧光血清抗体和兔抗HFRS IgG致敏血球为本室自制。 1．5疫苗侯选毒株在Vero细胞上的适应性传代分别将汉滩病毒ZJ2、ZJ4、ZJ7株和汉城病毒ZJ5株 鼠脑标本研磨制成10％的鼠脑悬液，离心后取上清液接种Vero细胞，进行适应性传代，培养7天左右，取 细胞刮片进行直接免疫荧光法(FA)检查细胞感染情况，待感染量达+++++++将细胞瓶冻入一30℃冰 箱，过夜后融化离心，取上清传代，连续传5代，每代取细胞冻融液少许，用来测定病毒滴度和抗原含量。 1．6FA检测HFRs病毒抗原表达取各代培养细胞刮片，按FA常规方法进行抗原检铡。 1．7 种液，做lO倍系列稀释，分别接种到E6单层细胞孔，接种量为lOul／孔，每个稀释度接种4孔，置3