水禽禽流感H5N1亚型超微病理的研究.pdfVIP

————一查查苎生堡銎塑堕塑型壅堑些墨垄塑 水禽禽流感H5N1亚型超微病理研究 郭闯‘2，王永坤‘，朱国强‘， (1．扬州大学兽医学院，茳苏扬州，225 0036) 009；2．江苏省水产养殖病防中q，江苏南京，21 摘要：本实验应用电子显微镜技术，系统地比较了人工感染不同来源的三个禽流感毒株(ZM、SG及JC) 的实验动物机体的超微病变，旨在了解水禽来源和鸡源来源的AIV引起细胞超微病变的规律及异同，比较 并探寻其组织嗜性规律，在细胞和亚细胞水平上为比较不同来源的AIV致病力的差异提供有力佐证。透射 电镜超薄切片结果表明上述三个毒株均可引起试验用禽感染机体肝、胰、脾、肾、肺、小脑、大脑、心脏、 腺胃和肌肉等实质器官组织细胞的超微病变。其中zM株感染机体脾脏、腺胃：SG株大脑、肾iJc株小脑、 腺胃均可观察到流感病毒粒子：zM株感染机体心脏和直肠以及SG株感染机体胰腺细胞均可观察到细胞凋 亡趋向。扫描电镜结果显示这三个毒株均引起感染机体消化道粘膜上皮细胞和气管粘膜上皮细胞发生微绒 毛脱落、纤毛脱落、分泌颗粒增多、细胞游离面破溃等显著的超微病变。其中ZM感染机体食道、气管、 盲肠、腺胃粘膜上皮细胞：SG株感染机体食道、Jc株感染机体食道、法氏囊、盲肠粘膜上皮细胞均可观 察到流感病毒粒子。以上实验结果表明禽流感毒株有组织泛嗜性：禽流感病毒水禽分离株已可致感染机体 严重的细胞超微病变，水禽已不单单仅充当禽流感病毒自然宿主的角色。佐证了本课题组前期的水禽禽流 感流行病调查结果及相关的生物学特性的研究。本研究所得结果可以作为禽流感病毒生物学致病性的一份 详实资料，为以后禽流感病毒的相关研究提供参考和佐证。 关键词：禽流感 超微病理 凋亡水禽 1 材料 1．1 实验用毒株 番鸭分离株zM(A／Muscovy／zhejiang／2000(H5NI)) 鸡源分离株Jc(A／chicken／Jiangsu／2000(H5NI)) 鹅源分离株sG(A／G00se／shanghai／200C((H5NI)) 1．2 实验动物 6周龄SPF鸡购于南京药械厂：10周龄非免疫麻鸭、非免疫鹅自孵自养，接种同源病毒(JC株接种鸡、 NDV的HI抗体效价均为零。 1．3电镜制样用试剂 生物组织固定液戊二醛，四氧化锇，PBS清洗液，脱水剂，无水丙酮，干燥剂无水硫酸钠，环氧树脂 金。 1．4主要仪器 Jung IB一3或IB～5离子溅射仪：Philips HCP-2型临界点干燥仪：Giko 超薄切片机；Hitachi 人奇共忠传染璃防治研究新成果汇编 透射电镜；PhilipsXL30一ESEM扫描电镜。 2． 方法 2．1动物感染 上述三个毒株的含毒新鲜尿囊液分别无菌生理盐水作1：10稀释，按0．2ml／只的剂量接种试验用禽， NDV的HI抗体效价。 2．2透射电镜超薄切片样品的制各和观察 2．2．I取材 待感染相应毒株的试验用禽开始出现临床症状如精神沉郁、食欲减退或废绝，拉黄绿色稀粪时，立即活 体解剖暴露个脏器，进行透射电镜样品的取材，具体器官为：心、肝、脾、肺、肾、胰脏、法氏囊、肌肉、 大脑、小脑、腺胃、十二指肠、直肠。首先剪取--,J,块器官组织迅速投入滴有预冷的2．5％戊二醛的载玻 片上，用双面刀片将待取组织材料切成ixlxlmm3大小的小块，然后投入装有2，5％戊二醛的青霉素小瓶内 置4℃冰箱固定2h。 2．2．2漂洗 用0．1MPH7．2PBS清洗4次，15min／次。 2．2．3后固定 用四氧化锇固定2h，然后用0．1MPH7．2PBS清洗4次，15min／次。 2．2．4脱水 此部分处理能使非水溶性的包埋介质能够进入组织内部。丙酮逐级梯度脱水：50％～70％一80％一90％ 一95％一100％一100％+无水NazsO一一100”无水NazSO一，15min／次。 2．2．5浸透与包埋 先