苏云金芽胞杆菌4AJ1细菌素对单增李斯特菌地活性研究.pdfVIP

苏云金芽胞杆菌4AJ1细菌素对单增李斯特菌的活性研究 潘洁茹 肖颖 张巧铃 李丽芬 刘秀峰 叶海梅 黄天培 郑能雄 350002，福州市疾病预防控制中心；福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室 [摘要] [目的]研究苏云金芽胞杆菌 （Bacillusthuringiensis，简称Bt）细菌素(bacteriocin)对单核细胞增多性李斯 特菌 （Listeriamonocytogenes，简称Lm）的抑菌活性。并进一步从细菌素产生过程动态监测、部分纯化及其生化特性等方面 分析了Bt4AJ1细菌素的各项指标。[方法]采用双层覆盖法确定Bt4AJ1对LmATCC15313的抑制作用；利用饱和硫酸 铵溶液分级沉降Bt4AJ1上清液，部分纯化细菌素4AJ1；采用牛津杯方法测定不同饱和度的硫酸铵沉降得到的细菌素 4AJ1的抑菌活性，并利用Tricine-SDS电泳和凝胶原位检测技术分析细菌素4AJ1的分子量；采用牛津杯法测定 酶、温度和pH值对细菌素4AJ1活性的影响。[结果]Bt4AJ1发酵上清液对LmATCC15313有抑制作用。Bt4AJ1在培养 24h时对LmATCC15313具有最高的活性，其细菌素活性最高达522.82U。Tricine-SDS电泳结果表明70％、80 ％和90％的饱和硫酸铵对细菌素具有较好的沉降效果。凝胶原位技术确定细菌素4AJ1分子量约为6.5KD。胰蛋白酶、 脂肪酶-Ⅶ和蛋白酶K会使细菌素4AJ1的抗菌活性明显提高，而α-胰凝乳蛋白酶-Ⅱ、RNA酶和α-淀粉酶都会降低 细菌4AJ1的抗菌活性。细菌素具有较高的耐热性，在80℃时仍有活性，细菌素在pH值6～9时保持活性稳定。[结论]对 LmATCC15313具有明显抑制作用的细菌素4AJ1是一种分子量约6.5KD的多肤，具有较高的耐热性，较广的pH耐受范 围，在预防和控制Lm引起的食源性疾病上具有潜在的价值。 [关键词] 苏云金芽胞杆菌;单核细胞增多性李斯特菌;细菌素 ActivityofBacillusthuringiensis4AJ1Bacteriocin againstListeriamonocytogenes PANJieruXIAOYingZHANGQiaoling LiLifenLIUXiufengYEHaimei HUANGTianpei,ZHENGNengxiong FuzhouCenterforDiseaseControlandPrevention,KeyLaboratoryofBiopesticideandChemicalBiology, MinistryofEducation,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002,Fujian,China Abstract [Objective]TostudytheantibacterialactivityofBacillusthuringiensis(Bt)bacteriocinagainstListeriamonocyto genes(Lm),analyzetheproductionprocess,partiallypurifybacteriocinandinvestigatethebiochemicalcharacteristiesofBt4AJ1 bacteriocin.[Methods]Double-hyeragaroverlayplaqueassaywasusedtoevaluatetheactivityofBt4AJ1againstLmATCC 15313.ThebacteriocinproducedbyBt4AJ1waspartially-purifiedwithammoniumsulphateprecipitation.Oxfordcupplatemeth odwasusedtostudytheantibacterialactivityofthepartially-parifiedbactericoin4AJ1.Tricine-SDSanddirectdetec tionofbacteriocinactivityonsodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegel(SDS)techniqueswereusedtoanalythemolec ular