利用PCR-DGGE探讨益生菌及其代谢产物对肉鸡肠道菌相之影响.pdfVIP

第十一届优质鸡的改良生产暨发展研讨会 海口 利用 PCR-DGGE 探讨益生菌及其代谢产物对肉鸡肠道菌相之影响 张齐桓，王志轩，李滋泰，余碧 （国立中兴大学 动物科学系，台中 40227 ） 摘要：乳酸菌因具有改善肠道菌相与代谢性能，经常作为饲料添加物应用于家畜禽饲粮中，作为判断动 物肠道健康的指标之一。而肠道肠道菌相之监测在微生物学上已有许多方法可量化，其中 PCR-DGGE (polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis)则为经常使用的方法。本试验目的为利用 PCR-DGGE 探讨益生菌及其代谢产物对白肉鸡肠道菌相之影响，而试验中所用的的复合益生菌株为 Lactobacillus acidophilus LAP5 、L. plantarum LP07 及 Enterococcus faecium EF08 。试验动物以 500 只 1 日 龄白肉鸡分为五个处理，分别为对照组、添加 0.3%培养之上清液(supernatant ﹔SUP)、0.1%菌体(pellet ﹔ PEL) 、0.1%混和液(SUP 及 PEL ﹔MIX)及 10ppm 抗生素(avilamycin)处理组。结果显示处理间对肉鸡生长 性状无显著性的影响，SUP、PEL 及 MIX 处理组可以增加嗉囊、回肠及盲肠的乳酸菌菌数，且显著减少 盲肠内容物中氨态氮浓度。经由软件分析 DGGE 胶体，结果呈现条带图谱在各处理之间具有分群现象。 综合上述，益生菌及其代谢产物添加于白肉鸡饲粮中可以增加肠道乳酸菌及减少大肠杆菌群、减少盲肠 内容物中氨态氮的产生，对提高肠道菌相的同构型有正面帮助。 关键词：PCR ；DDGE ；肠道菌相；乳酸菌 1 前言 健康动物之肠内菌相，可以长期维持在一稳定之动态平衡。然而菌相的组成亦受外在及内在因子的 [1] 影响，包括宿主肠道环境、微生物之因子、菌种间的交互作用与饲粮因子等 。 由于欧盟国家自2006 年起全面禁止使用抗生素作为生长促进剂，近年来兴起许多致力于改善肠道菌 相之生长促进剂的研究，例如在饲粮中添加益生菌（probiotics ）、益生质（prebiotics ）、植生物质 [2] [3] [4] （phytogentics ）及酸化剂（acidify ）等 。其应用机制均以改善动物肠道健康或菌相平衡进而达到 促进生长之效果。其中益生菌产品不论以单一或多重菌株之产品对肠道菌相改善与健康之效果最被研究 者及产业界提出[5] [6] 。 有关肠道微生物相之监测，可利用多种之技术，含传统之菌培养法，至现今各种之分子生物学之方 法。由于肠道内容物中菌相组成复杂，且许多菌株间有共生关系，无法以体外培养的方式完全检测出。 [7] 部分学者估计，鸡只盲肠的微生物仅有 10-60％可藉由培养方式分离出来 。因此，近年来发展出许多应 [8] 用分子技术的免培养（culture-independent ）方法在肠道细菌相的研究上扮演极为重要的角色 。Lu et al. [9]配合 16SrDNA 定序的方式更加精确的探讨鸡只肠道微生物菌相的比例，指出鸡只回肠中菌相分布主要 为乳酸菌，而盲肠中以梭状芽孢杆菌所占的比例则超过 50 ％，且发现鸡只间肠道菌相的组成差异极大。 Chen et al.[10]指出利用 DGGE 方法能充分筛选与分离肠道菌株，并能于 24H 内获得主要菌相之分布结果。 此技术也广泛应用在猪肠道菌相之监测分布及菌种歧异度（diversity ）之比较[11] 。而本试验研究目的为 利用 PCR-DGGE 探讨饲粮中添加益生菌及其代谢产物对白肉鸡肠道菌相之影响。 2 材料与方法 2.1 益生菌及其代谢产物粉末之制备 试验使用之益生菌菌株由生合生物科技股份有限公司提供，分别为 L. acidophilus LA