诱导物质的微核测试h和蝗虫的减数分裂观察.docVIP

诱导物质的微核测试 一、实验原理 微核（micronuclei）简称(MCN)是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核程圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的。经过科研工作证实，整条的染色体或好几条也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核快。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或是辐射累计效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其他高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。 二、实验目的 1.是了解微核测定的方法和意义。 2.为寻找新的测试系统或测定更多的环境因素。 三、实验材料 蚕豆根尖。 四、实验器具和药品 1.固定液：3乙醇：1冰醋酸 2.染液：改良碱性品红液 配方Ⅰ：石碳酸品红(carbol fuchsin): 母液A：3g碱性品红，溶解于100ml的70％酒精中(此液可长期保存)。 母液B：取母液A10ml，加入90ml的5％石碳酸水溶液(两周内使用)。 石碳酸品红染色液：取母液B45ml，加入6ml冰醋酸和6ml37％甲醛。 配方Ⅱ：改良石碳酸品红 取石碳酸品红染色液2～10ml，加入90～98ml45％的醋酸和1.8g山梨醇。可以普遍应用于植物染色体的压片。 3.实验用具：剪刀，镊子，载玻片，盖玻片等。 五、实验步骤 蚕豆浸种催芽：将蚕豆种子放入盛有自来水的容器内，置25℃的温箱中浸泡24～48h，此间每天换水2次，待种子吸胀破胸后，用纱布松松包裹，置解剖盘中，保持湿度，再室温下催芽，将种子初生根长至2cm左右时，可用于检测药物溶液和环境水样遗传毒性。 根尖固定：切取1cm的幼根，用卡诺氏固定液24h，转到70％乙醇中，4℃冰箱保存备用。 根尖水解：将固定好的根尖放入称量瓶，用蒸馏水或自来水浸洗2次，5min/次，吸净水后，加入6mol/LHCl将根尖浸泡，于60℃水浴锅中水解10min左右，用水冲洗2～3次，每次5min。 染色：将根尖放在洁净的载玻片上，用解剖针截下4mm左右的根尖，将根尖捣碎，加1～2滴改良的苯酚品红染液染色10min左右，加上盖玻片。 镜检：将制好的片子于显微镜下观察。并绘图。 实验报告：绘出一个具有微核的蚕豆细胞图。 思考题 1. 在蚕豆根尖细胞微核检测中，为什么要进行恢复培养？ 2. 产生微核的根尖细胞在产生前的分裂中期可能出现什么样的中期分裂图像？ 蝗虫精巢减数分裂压片标本的制备与观察 【实验目的】 通过标本制备和观察了解生殖细胞的减数分裂过程。 【实验用品】 一、材料和标本 蝗虫精巢。 二、器材和仪器 显微镜、擦镜纸、解剖针、眼科镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、培养皿、冰箱。 三、试剂 70％乙醇、改良碱性品红染液。 【实验内容】 (一)原理 减数分裂(Meiosis)是配子发生过程中的一种特殊有丝分裂，即染色体复制一次，而细胞连续分裂两次，结果使染色体数日减半的过程。减数分裂过程中体现了遗传三定律，所以说减数分裂在稳定种的遗传性状和繁殖中均起着重要作用。 蝗虫精巢取材方便，标本制备方法简单，染色体数目较少，例如，蝗虫初级精母细胞染色体数2n=22+X，经过减数分裂形成四个精细胞，每个精细胞的染色体数为n=ll+X或n=11(注：蝗虫的性别决定与人类不同，雌性有两条X染色体、雄性为XO，即只有一条X染色体，没有Y染色体)，一般多采用它来研究观察减数分裂染色体形态变化。 (二)蝗虫精巢压片标本的制备 l．采集 采集到各期分裂相的标本是实验成功的关键，解决这一关键要把握两点(1)时间：湖北地区采集，一般在7月15至25日为宜；(2)虫体特征：雄虫翘膀长到刚好盖住腹部一半时，正好是雄虫精子发生的峰季，采集最适。在公园、田埂、河边、路旁的草丛中均可采到。 2．取材 将采到的雄虫，用大头针固定在木板或纸盒上，沿腹部背中线剪开体壁，见消化管背侧的浅黄色结构即是精巢，用镊子分离出来。 3．固定 把取出的精巢立即放入Carnoy固定液中，固定1小时，在期间用大头针小心分离精细管，加速固定，促进脂肪溶解。固定后移入70％乙醇中存放于4℃冰箱备用。 4．染色 取固定好的精细管2～3条，置于干净载玻片中央，用45％醋酸处理5分钟，用吸水纸吸干后，加1～2滴醋酸洋红染色15分钟。 5．压片 在染色材料上盖上盖玻片，再在盖玻片上放一块吸水纸，用大拇指垂直在盖玻片上适力下压(压片时不要滑动盖片)使精细管破裂细胞平展开，吸去溢出