五大营养物质常规分析操作规程.docVIP

饲料中常规成分的测定方法一、水分的测定——烘箱干燥法 1、原理 将试样在105±2℃的烘箱中烘至恒重，所失去的质量即是水分含量。 2、仪器：烘箱、称量皿3个、托盘1个、棉纱手套1套、电子天平、刷子、筛子。 3、步骤 (1)称量皿的恒重：称量皿105℃±2℃烘箱1h干燥器冷却30min称重记数（精确到0.0002g）再烘30min干燥器冷却30min称重（直至两次质量差小于0.0005g为恒重） （2）取试样5g（过40目）称量皿(半开盖)105℃±2℃烘箱3h盖好盖子后取出放到干燥器冷却30min称重记数（精确到0.001g）105℃±2℃再烘1h干燥器冷却30min称重（直至两次质量差小于0.001g为恒重）取其较小的值进行计算（每个样品做3个重复） 4、结果计算 水分=水分质量/样品质量*100%=(W1-W2)/(W1-W0)*100% W1: 105±2℃烘干前试样及称量皿质量（g） W2:105±2℃烘干后试样及称量皿质量（g） W0:已恒重的称量皿质量（g） 注：每个平行样测定相差不得超过0.2%，否则重做。5、注意事项 （1）打开烘箱时必须戴棉手套，半开盖和盖盖子都必须在烘箱里边操作； （2）放到干燥器的称量皿必须先放先称，保证冷却时间一致； （3）注意干燥器里边干燥剂的颜色，如果变红，必须倒出来再烘干。 二、蛋白的测定 1、原理 饲料中的有机物在浓硫酸作用下被消化，其中真蛋白质和氨化物中的N转化为（NH4)2SO4中的N，其他的非氮物质则以CO2、H2O和SO2逸出。 消化液中的（NH4)2SO4在浓碱的作用下进行蒸馏，放出的NH3用硼酸吸收： （NH4)2SO4+2NaOH2 NH3+2H2O+Na2SO4 4H3BO3+NH3→NH4HB4O7+5H2O 然后用甲基红-溴甲酚绿做指示剂，用标准酸溶液滴定： NH4HB4O7+HCl+5H2ONH4Cl+4H3BO3 根据酸标准溶液的浓度和消耗的体积，即可计算出氮的含量，乘以相应的蛋白质换算系数（一般用6.25，是按蛋白质中平均含氮量为16％推算而出来的），即为粗蛋白质含量。 2、仪器及药品 （1）仪器：凯氏烧瓶3个、蒸溜发生装置1套、止水夹2个、100ml容量瓶3个、100ml锥形瓶4个、10ml移液管2根。 3、步骤 （1）试样的消煮：取试样0.5g于光洁的纸上，卷成圆筒凯氏烧瓶瓶底加入催化剂5g（CuSO4:K2SO4=1:9）混合均匀加入浓硫酸10ml、玻璃珠两颗小火消煮（两个小时左右）至样品焦化、泡沫小时加强火力（360-410）直至溶液澄清后再继续加热至少30min。 （2）氮的蒸馏（本实验采用半微量蒸馏法）： 冷却好的消煮液加蒸馏水20ml用蒸馏水少量多次冲洗凯氏烧瓶，完全转移到容量瓶，再定容到100ml为试样分解液； 取35ml2%的硼酸溶液加入混合指示剂（甲基红-溴甲酚绿）2滴使冷凝管末端浸入此溶液； 在蒸馏发生器重加入甲基红指示剂数滴硫酸数滴并且使容易保持橙红色，否则补加硫酸； 准确移取10ml注入蒸馏装置的反应室用少量蒸馏水冲洗进样入口塞好入口玻璃塞加入10ml40%NaOH溶液于玻璃塞外面小心提起玻璃塞使之流入反应室（要轻轻的提起使其慢慢流入，切勿用力拔起，要保证流入的速度）再将玻璃塞塞好水封（防止漏气）蒸馏4min使其冷凝管末端离开液面用蒸馏水冲洗冷凝管末端再蒸馏1min滴定。 （3）滴定：吸收NH3的吸收液用0.1mol/L的HCl标准液滴定溶液由蓝绿色变为灰红色。 （4）空白测定：取蔗糖0.1g（代替样品）重复以上操作消耗的HCl不得超过0.3ml。（消除系统误差）。 （5）测定步骤的检验：精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按（4）的步骤操作，按公式计算，测得硫酸铵含氮量为21.19%±0.2%时，允许相对偏差为2%，当粗蛋白含量在10%以下时，允许相对误差为3%。 （氮含量=（V2-V1)*C*0.014/(W*V3/V4)*100%） 4、结果计算 粗蛋白质=（V2-V1)*C*0.014*F/(W*V3/V4)*100% V2:滴定试样时所需盐酸标准溶液体积（ml）； V1:滴定空白时所需盐酸标准溶液体积（ml）； C:盐酸标准溶液摩尔浓度(mol/L)； W:试样质量(g)； V3:试样分解液总体积（ml）； V4:试样分解液蒸馏用体积（ml）； 0.014:氮的毫摩尔质量； F:氮换算成蛋白质的系数（平均值为6.25）。 5、注意事项 （1） 样品应是均匀的。固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。 （2） 样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。 （3） 在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在