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制备ghosts： 1, 洗细胞：肝素抗凝管静脉取血2ml。缓慢颠倒几次,标记好后放入4℃冰箱。2000rpm 离心10min, 用一毫升的注射器小心伸入采血管,吸掉红细胞表面的一层白色细胞层和橙黄色层(buffy coat),尽量吸掉可见的血清，加入预先配置好的5mM磷酸盐缓冲液(0.9℅w/vNaCl中含有5 mM的磷酸盐缓冲液,pH=8. 0或5.6~5.9) 至釆血管的5ml刻度线,小心颠倒几次再次4°C, 2000rpm 离心10min,此过程重复三到五次,直 到离心后的上清液与磷酸盐缓冲液颜色相似为止。去掉上清液,吸取余下的红细胞的中间部分置于10 ml的预先用磷酸盐缓冲液润洗过的离心管中备用,上层红细胞和底层粘附在釆血管上的褐色细胞层丢弃。 2，低渗裂解：洗好的红细胞以1: 10的体积加入低渗裂解液（5mM磷酸盐缓冲液，PH=8或5.6~5.9, 含1mM EDTA,1mM PMSF）放入4℃冰箱中裂解三个小时,中途每隔半小时上下颠倒几次,防止红细胞沉底而裂解不完全。 3，裂解后的红细胞高速离心（15000 rpm，45min，4℃），弃上清,加入3到5倍体积的裂解液,混匀,4℃, 15000 rpm离心45分钟,重复3到5次,直到上清为无色为止,弃上清。最后将血影细胞至于5mM磷酸盐缓冲液(PH=8或5.6~5.9) 4℃下保存，一周内用尽。 0.2M?PB（100ml)配方： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水 （或14.32g Na2HPO4-12H2O，溶于 200ml 水） 0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 （或6.24gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水） pH??0.2M?NaH2PO4（ml）? 0.2M?Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8?????????????92???????????????????????????? ?8??????? 5.9?????????????90????????????????????????????? 10 6.0?????????????87.7?????????????????????????? 12.3? 8 5.3 94.7 首先配100ml 0.2M? pH=8. 0的PB：5.3ml0.2M?NaH2PO4+94.7ml Na2HPO4。 配100ml 0.2M? pH=5.8的PB：92ml0.2M?NaH2PO4+8ml Na2HPO4。 然后分别取30ml稀释40倍得到1.2L 5mM磷酸盐缓冲液，PH=8和1.2L 5mM磷酸盐缓冲液，PH=5.8。 (1) 配制5mM磷酸盐缓冲液(0.9℅w/v NaCl中含有5 mM的磷酸盐缓冲液,pH=8. 0或5.8)： 分别取400ml5mM磷酸盐缓冲液，PH=8和5mM磷酸盐缓冲液，PH=5.8加入3.6gNaCl 得到400ml 0.9℅w/v NaCl中含有5 mM的磷酸盐缓冲液,pH=8. 0和300ml 0.9℅w/v NaCl中含有5 mM的磷酸盐缓冲液,pH=5.8 （2）分别取400ml5mM磷酸盐缓冲液，PH=8和5mM磷酸盐缓冲液，PH=5.8加入 0.1169g EDTA, 0.0697g PMSF(PMSF现用现加)得到400ml5mM磷酸盐缓冲液，PH=8，含1mM EDTA,1mM PMSF和400ml5mM磷酸盐缓冲液，PH=5.8，含1mM EDTA,1mM PMSF。 （3）剩下400ml5mM磷酸盐缓冲液，PH=8和400ml5mM磷酸盐缓冲液，PH=5.8。 EDTA:292.24?g·mol?1 PMSF:174.19 g·mol?1 400ml,1mM EDTA：m=0.001mol/L*0.4L*292.24?g·mol?1=0.1169g 400ml,1mM PMSF: m=0.001mol/L*0.4L*174.19 g·mol?1=0.0697g 注：PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。