猪促黄体素受体(LHR)基因单核苷酸多态性地研究.pdfVIP

猹坌壬遗僮燕塞独左洼II293 猪促黄体素受体(LHR)基因单核苷酸多态性的研究 王爱华1，2 李宁1 石德顺2 吴常信3 (1．中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京，100094) (2．广西大学动物繁殖研究所，南宁，570004) (3．中国农业大学动物科技学院，北京，100094) 摘要本研究对猪LHR基因的外显子11的部分序列进行了SSCP分析，结果发现在该基因序列 中存在1个c—T突变，氨基酸序列分析表明该突变并没有造成该段蛋白序列的改变，为一沉默突变。 该突变是否具有生理学意义还需进一步进行研究。 关键词LHR基因；SNPs；外显子；SSCP LHR属于一类G蛋白偶连的蛋白受体，该受体的特点是有一含7个跨膜螺旋的区域。LHR与 FSHR、TSHR等构成了一个独立的亚家族，它们都由一条长的具有同源性的膜外激素结合区，该区域中 有多个富含亮氨酸的重复序列，通过一具有较少同源性的氨基酸链与跨膜区的N端相连。人编码LHR cDNA和小鼠 eDNA推算猪的LHR有696个氨基酸组成，其信号肽可能由27个氨基酸组成。猪的LHR 的有很高的同源性。此外，在人和猪上都有一些小分子量的蛋白质异构体，它们可能是由不同的剪接形 列进行多态性位点分析，为进一步分析该基因与生产性状的关系奠定基础。 1材料与方法 1．1实验材料 二花脸(6头)、约克夏(6头)和长白猪(6头)血样采自浙江常熟良种猪场，颈静脉采血，ACD抗凝， 一20℃冻存。 accenssion 根据猪LHR基因的mRNA序列(Genbank accenssion 列(Genbank 猪LHR基因外显子11的序列并进行SSCP分析。 1．2实验方法 1．2．1基因组DNA提取参照文献4。 1．2．2PCR条件反应总体积为25Id，10×buffer成分为100mmol／L KCI，15mmol／LMgCl2，0．1％明胶，dNTP终浓度为100retool／1。 1．2．3PCR产物与质粒载体连接10山反应体系中含T载体0．5斗l(50ng／山)，外源DNA4山(50ng／ 2．5一，14℃水浴16h。连接产物经常规方法转化大肠杆菌后，碱 m)，T4DNA连接酶1山(3U／山)，H：0 裂解法提取阳性质粒进行测序反应。 1．2．4 14％PAGE，1×TBE，6V／cm，室温电泳10h。 2结果与分析 294 II生国动擅煎佳直弛受塞进展 到一319bp序列，对该序列进行克隆和测序，同源性比较显示该序列与已发表的mRNA序列的同源性 1)。对该位点的预测氨基酸顺序分析表明：该c—T突变没有引起氨基酸残基的变化，为一沉默突变。 TGTG^AG舡^ l T叮TA^CCCC 61 1k啦醵●瞰h GCC^Tr^1BC 121 T从ACTGACAGTGCCTCCTT CTACT℃ATrc 18l GcTcTACCTG 241 髓w鸭吐m CGCC^TAGACTGGCAGACAG 薰一 瓣||蚕一 纂一 301GGAATGGGTGTAGTCTrGC 圈1猪LHR基因外显子11序列及其多态性位点【图中下划线位置 3讨论 目前，在人