组蛋白去乙酰化酶抑制剂抑制膀胱癌T24细胞株生长与诱导其凋亡的研究.pdfVIP

首届临床泌屎外f：I泉志l蜀际学术会议论文lL蝙 ·肿瘤专题· 组蛋白去乙酰化酶抑制剂抑制膀胱癌T24细胞株生长 和诱导其凋亡的研究 第二军医大学附属长征医院器官移植研究所肾移植科(上海，200003) 曲巍王立明朱有华许涛付莉莉高文波 【摘要]目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂类药物MS．275对人膀胱癌T24细胞的生长抑制作 用和诱导凋亡作用，为临床应用提供有价值的实验依据。方法：将不同浓度的MS-275作用于膀胱 癌T24细胞，用MTT法检测其对T24细胞的生长抑制作用及观察其有效作用浓度，分别采用光学 显微镜、透射电子显微镜及流式细胞仪观察和检测T24细胞凋亡情况。结果：MTI法检测显示， MS．275对人膀胱癌T24细胞的生长抑制作用存在明显的剂量、时间依赖关系，显微镜下可观察到大 量的凋亡形态特征的细胞，流式细胞仪可检测到典型的亚G1期凋亡峰。结论：组蛋白去乙酰化酶 抑制剂类药物具有体外抗膀胱癌作用。其重要作用机制之一是诱导膀胱癌细胞凋亡，并有望成为新 的抗膀胱肿瘤药物。 [关键词]膀胱肿瘤组蛋白去乙酰化酶抑制剂细胞凋亡 膀胱肿瘤在泌尿生殖系统瘤中发病率占第一位，生物学行为呈多样性，目前对其发生、浸润及 转移的机制尚未完全明子，临床常用的化疗或生物制剂疗法有不甚满意的方面，寻找疗效好、副作 inhibitors， 用小的药物是当今面临的重要课题。组蛋白去乙醇酰化酶抑制剂(histonedeacetylase 阻滞、诱导分化和凋亡等机制对血液系统肿瘤【11和一些实体肿瘤闭有明显抑制作用。但针对HDACls 细胞系，观察HDACIs类药物在体外能否抑制膀胱癌细胞生长和诱导其凋亡，为其临床应用于治疗 膀胱癌提供理论依据。 1材料与方法 1．1材料 入T24膀胱癌细胞系中国科学院上海生化细胞研究所提供，MS-275购于德国Merck公司， 研究所产品。 1．2方法 培养液培养，在37·、5％C02饱和湿度的条件下生长传代，实验时取对数生长期的细胞。MS-275 用DMSO溶解，贮存浓度为lmg／ml，实验时DMSO在培养中的浓度控制在1％以内。 1．2．2 1mol／L的MS-275作为实验组，另外加入与实验组 壁且生长良好后，加入浓度为0．5、1、2、4、8 等量的DMSO作为阴性对照，DMEM培养液不加细胞作空白对照，各设5个复孔。继续培养24、 L。再培养4h，小心吸弃孔内培养液， 48、72、96、120h后，每iLllll人5mg／mL的Mrr溶液100i 1000l 每：ILJJD 处理组吸光度，对照组吸光度)×100％。 4 酋届临J禾泌碌外科杂志国际学术会议沦文汇编 I 2 i mol／L 3细胞凋亡的形态学观察将4、8 MS．275作用于对数生长期的T24细胞．同时设空白 对照组，置于37·、5％CO：培养箱中培养·倒置相差显微镜观察；遂日观察培养细胞的大体形态 变化。·HE染色光镜F观察：分别于24、48及72h将贴壁和悬浮的所有细胞收获，PBS漂洗两次， 制备细胞悬液。细胞涂片干燥后，用4％的多聚甲醛固定，经HE染色后封片，油镜下观察细胞形态。 ·透射电子显微镜观察：将收获的T24细胞每组各lO’制成细胞悬液，离心去上清液后用2．5戊三醛 前固定．PBS漂洗2次，2％的锇酸后固定，然后经包埋、超薄切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双染色 后．送H．800透射电镜观察并拍照。 1．2．4 mol／L PI染色法流式细胞仪(FCM)检测对数生长期的T24细胞经浓度分别为1、2、4、80i 检测，每次计数10000个细胞，观察凋亡率的变化。 l。2．5统计学处理采用SPSSll．5统计软件分析，实验数据X±S表示，数据比较采用方差分析。 2结