原发性良恶性卵巢肿瘤和MTS2%2fp15基因变异的研究及其临床价值.pdfVIP

原发性良怒性卵巢肿瘤与MrS2／p15基因变异的研究及其临床价值 135 原发性良恶性卵巢肿瘤与MTS2／p15基因变异的 研究及其临床价值 赵明张国玲葛伟郑敏之周瑾许凯黎 死亡率均居妇科恶性肿瘤之首，严重地危害妇女的生命健康。卵巢癌死亡率增高的主要原因 在于无法给予早期诊断治疗，从而导致患者初诊时已属中晚期，又因该癌恶性程度高，易复发 及转移。因此，当今急需通过研究卵巢癌发生、发展及转移的生物学特性，从而为卵巢癌患者 的临床治疗提供指导。 近年来的研究提示，抑癌基因对细胞增殖周期各环节起直接或间接的调控作用，～旦抑癌 的变异尤为突出。最近，人们从染色体9p21区域处分离出两个细胞周期素依赖性激酶抑制因 瘤演变有关uj。继后，在多种肿瘤细胞株和原发性肿瘤中相继观察到p15、p16基因发生纯合 细胞株及上皮性卵巢癌中p15、p16基因均可发生变异L3J。然而，对于人体原发性上皮性卵巢 及分析经病理证实的77例原发性上皮性卵巢肿瘤组织中p15基因的纯合性丢失及其突变情 况，以期研究上皮性良恶性卵巢肿瘤与p15基因变异的相关性及其临床意义。 材料与方法 (一)组织标本来源 组织标本来自上海医科大学肿瘤医院妇住院患者。新鲜手术切除标本 在手术后1h内存放在液氮中保存。所有组织标本均经病理证实，共77例(其中恶性肿瘤55 例，良性肿瘤22例)。 (二)主要试剂 Ex— on2及pactin引物由中科院细胞生物学研究所合成。 (三)DNA纯化及P(、R扩增 本课题受卫生部科学基金及上海市科技发展基金资助 作者单位：200032上海市肿榴研究所(赵明周瑾许凯黎)；上{每医科大学肿瘤医院(张国玲葛伟 郑敏之) 中国癌症研究进展⑤ 量检测。 2．PCR扩增厦p15基因外显子2(Exon2)丢失检测 s；55℃， 30 s；72C，30 s，扩增p15基因外显子(Exon2)。 (2)p15基因Exon2引物序列：8erlse 5-AGC_- GAA『I]X)3GGll(；GGAAAlll)GGGTAAGAA。 nfin后，进行35个循环，条件为 同时有8-actin基因作为内对照，扩增条件：94℃变性5 94℃，30s；55℃，2 min。 rain；72℃，3 Bactin弓I物序列：s豇lse 57．CTAGAAG． CAll’rGCGGl粥AOGAl℃GAGGGGC。 3．PCR扩增产物电泳检测 者为纯合性丢失，两者均呈现条带为无丢失(附图)。 附圈PUll法检测上皮性卵巢肿瘤组织中p15基因纯合性丢失 1-6为卵巢癌标奉，其中2,5号出现p15基因纯台性丢失 (四)p15基因PCR-SSCP点突变检测 (1)FOR扩增产物加等体积变性液(95％甲酰胺，20 0．05％溴酚蓝)，95℃水浴变性5min，立即于冰浴骤冷，行8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (2)银染按Beidler方法进行。 (五)统计学分析 卡方检检。 原发性良恶性卵巢肿瘤与MT盟／p15基因变异的研究爰其临床价值 137 结 果 l一)77例原发性上皮性卵巢肿瘤p15基因纯台性丢失 丢失率为13．6％(3／22)，经统计学计算差异有显著性(PO．05)。