载药组织工程皮肤体外生物学性能地研究.pdfVIP

一生肌象皮膏在临床上治愈了大量难以愈合的感染性创面，表现为伤口愈合快、抗感染力强、 创面脓液多、愈合后瘢痕组织松软，其作用机制包括：提高微血管的通透性、改善局部徽循 环：构成体内网络调节体系：诱导创面局部活性物质的自分泌和旁分泌；维持创面微环境平 衡构成体内网络调节体系。本研究采用明胶一壳聚糖支架材料复合不同浓度的生肌液成功构 建载药组织工程支架，不但为种子细胞的生长提供有效的三维空问，并在生肌液的作用下， KC与FB获得最大量的增殖。而且生肌液作为一种免疫激活剂，还可促进创面附近淋巴细胞 等，共同参与并加强了局部和整体的体液免疫和细胞免疫功能，构成含有人量免疫活性物质 其有高活性的微环境；在高活区内纤维结合蛋白(FN)及其它活性因子相互调节，激活FB并 促进其增殖和I、Ⅲ型胶原在mRNA水平上的表达，进而加速肉芽组织形成；各种细胞因子 联合作用，对种子细胞的增殖及刨面的上皮化进程有明显的促进作用。这种刺激因素具有细 胞因子的调节作用。且较细胞因子更为安全，更适合作为在体诱导因素使用。 正常表皮由基底层、棘细胞层、颗粒层、透明层、角质层构成，基底层细胞不断分裂， 部分细胞向上推进，形成其余各恳创面修复实验结果显示新生组织中各层细胞排列规则， 符台与正常表皮的结构特征，证明应用本研究的方法构建细胞一载药载体复合物应用到皮肤 缺损疮面能够达到快速、完全的修复目的。 在组织工程皮肤的研制中，制造一个模拟人体内微环境的由多种生长因子构成的网络调 控体系尚存在相当大的难度。本研究采用自体皮肤细胞分离获得种子细胞，无免疫原性，不 会被机体免疫系统所排斥：种子细胞中既包括KC，叉包括FB，为双层皮肤结构的构建提供 可能。将生肌液这一高效免疫激活因素与载体支架复合后构建细胞一载药载体复合物，使种 子细胞在生肌液与明胶—壳聚糖支架材料构建的复台支架中增殖，与创面组织中存在的粘附 因子相互作用，载体修复皮肤损伤；生肌液不但对KC及FB的增殖具有明显促进作用，还 可加强局部抗感染能力，激活多种免疫活性细胞和活性物质，构成具有高活性的微环境体系 能够在最短时间内有效扩展皮肤缺损处的覆盖面积，从而缩短皮肤缺损的愈合时间，为皮肤 损伤的治疗探索一条新途径。 载药组织工程皮肤体外生物学性能的研究 天津市天津医院骨科研究所张插李秀兰师宜健(300211) 皮肤作为人体晟大的器官，具有复杂的生理结构和多种重要生理功能。当皮肤遭受严重 烧伤、创伤、感染及糖尿病顽固性皮肤溃疡等损害时，大面积皮肤缺损的修复与重建成为棘 手的难题-本研究旨在利用自体皮肤细胞分离获得的种子细胞。短时闻扩增，将生肌液这～ 高效免疫激活因素与载体支架复合后构建细胞—载药载体复合物，使种子细胞在生肌液与明 胶一壳聚糖支架材料构建的复合支架中增殖，构建载药组织工程皮肤，为皮肤损伤的治疗探 索一条新途径。 l材料方法 1．1生肌液对皮肤种了细胞增殖的影响 养液中生地浓度为8mg／m1)、EGF(培养液含EGF|0ng／m1) J．1．2第3代角质形成细胞(Kc)、成纤维细胞(FB)分别消化成为单细胞，调细胞浓度为 4×104个／ml，接种于96孔板，每组平行5孔。培养1天待细胞完全贴壁后更换条件培养液。 1．1．3条件培养液培养1、3、5、7天分别进行~frr检测：吸去孔中液体，每孔加入5mg／ml 以未接种细胞的孔作为空白对照测定570hm的吸光度值。 1．1．4所得数据以SPSS软件进行统计学处理。 1．2载药支架对细胞粘附的影响 1．2．1 5种材料(非载药支架～基质材料中不含生肌液、1：5载药支架一基质材料中含生 一基质材料中含生肌液浓度为60mg／ml、l：12载药支架一基质材料中含生肌液浓度为 40mg／m1)分别修剪成1．3cm直径的圆片。co。照射消毒。放置于24孔板中。 体的24孔板。 1．2．3每隔3天更换新培养液，分别于培养7天、14天取材，石蜡包埋后作普通病理切 片，HE染色后计数每个高倍视野(400倍)中细胞数．每个标本观察6个视野，计数平均值， 作半定量检测。 1．3细胞与载药载体支架的生物相容性—朝织学与扫描镜观察 1．3．1 非载药支架、l：5载药支架、l：8．5载药支架Co。照射消毒，在6孔板中分组放置。 1．3．2第3代KC以常规方法消化成为单细胞，调细胞浓度为2x10s个／ml，接种予6孔 板，每隔3天更换新培养液。 1．3_3分别于4天、7天、14天取材，电镜固定液固定过夜，50％、75％、95％