有机溶剂中酶促合成海洋甘油酯地研究.pdfVIP

有机溶剂中酶促合成海洋甘油酯的研究 刘书成1，章超桦2，洪鹏志2 l中国科学院南海海洋研究所，广东，广州，510301 2湛江海洋大学食品科技学院，广东，湛江，524088 摘要：利用脂肪酶选择性的催化游离脂肪酸中u一3PUFA与甘油反应生成甘油酯，研究了各种因 素对酯化程度的影响。研究结果表明，利用脂肪酶Novozym435，在6mL的正已烷中，反应温度 40。0，甘油的含量2．59，PUFA0．49，初始水分含量0．5％，反应时间20h，在反应lh后添加lg 分子筛，酶添加量30mg，震荡频率150rpm，在此条件下酶促合成反应的酯化度达到了90％多。合 不饱和脂肪酸的含量仅有1．69％，几乎不含饱和脂肪酸。对产物进行凝胶柱层析分析可知，产物 游离脂肪酸(0．39％)的含量比较低。 关键词：脂肪酶；多不饱和脂肪酸(PUFA)；甘油酯 众所周知，鱼油中的多不饱和脂肪酸(PUFA)，尤其是二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯 酸(DHA)，在人体生物学中有重要的生物学意义。作为食用的DHA和EPA，在选择产品的化学型 式时主要考虑它们能被人们消化和吸收的难易程度，以及产品对人体的食用安全型问题。关于人 体究竟摄取何种型式的DHA和EPA比较合适，首先，甘油三酯在人体中的消化和吸收方式不同于 其他的化学型式，它是在脂肪酶作用下先水解卜位和3一位的脂肪酸，最后水解2一位的脂肪酸， 然后脂肪酸才被吸收利用。在摄取量不是太高的情况下，甘油三酯中的DHA和EPA可以被人体很 好的吸收。对于非甘油三酸酯裂，由于在甲酯化时使用了有毒的甲醇溶剂，产品中可能存在潜在 的甲醇毒性，对其食用安全性有所怀疑。脂肪酸乙酯在人体中很难被胰脂酶水解，这使得它在人 体绸织中难于被吸收利用。一般认为游离脂肪酸型DHA和EPA在人体中最易被吸收，其次是甘油 三酸酯型，而乙酯型最差。但是游离的。一3多不饱和脂肪酸容易氧化，而且游离脂肪酸带有酸 味，口感不好，直接作为食用难以被人们接受，而甘油三酯型DHA和EPA是作为食用的最好形式 …。DHA和EPA甘油酯在消化道中的水解速率比物理或化学方法富集得到的相应的甲酯或乙酯快， 同时，。．3PUFA的甘油酯比其甲酯或乙酯更适合机体吸收。从市场角度考虑，DHA和EPA的单酰、 双酰和三酰甘油酯将因为比相应的游离脂肪酸和烷基酯更“天然”而畅销”1。 14％-30％。在过去，由于天然型的甘油酯所含DHA和EPA的浓度较低；而脂肪酸乙酯型易得到 高纯度的产品，研究者们多偏重于对DHA和EPA乙酯型的研究，而对其甘油酯型产品研究相对较 少。但是近年来，对鱼油保健品，人们对其剂型为脂肪酸型、甲乙酯型的安全性提出了质疑，对 餐高的片油酯型保健品。因此本研究采用脂肪酶选择性的催化游离脂肪酸中u-3PUFA与甘油反 应生成甘油酯，使u-3PUFA富集在甘油酯分子上，从而达到富集的目的。 1材料与方法 1 1试验材料 黄蜻金枪鱼(Thunnus albacares)鱼头：来自印度洋，由广东南洋渔业公司提供。 TL 脂肪酶Novozym435，具有宽广的底物专一性；LipozymeTLIM，Lipozyme100L，都具有 1，3位专一性的食品级脂肪酶，购自诺维信公司。甘油；分子筛(4A)；有机溶剂；氢氧化钠； 乙醇；丙酮等均为分析纯。 恒温水浴摇床；移液器；过滤装置{分析天平(0．000lg)等。 1 2试验方法 I 2 1 u一3PUFA的制备 金枪鱼头经剁碎搅拌，然后用蛋白酶解法制取金枪鱼鱼油，经精炼制得金枪鱼精鱼油。 金枪鱼鱼油利用氢氧化钾乙醇溶液进行皂化，然后加入一定浓度的硫酸溶液进行酸化至pH2-3， 静l{分层，离心分离出油层，然后再用旋转蒸发仪除去乙醇溶剂即得鱼油混合脂肪酸。然后再利 _【_}j尿素包合法富集得到PUFA。 1．2．2酶促酯化合成反应 0．49(大约 50 1 次／min进行酯化反应，待反应进行1h后，加入19分子筛出去反应生成的水分。取0．5ml试样Hj 20mL)进行滴定，测