猪卵母细胞体外成熟和乙醇孤雌激活研究.pdfVIP

·122· 首届中青年高新技术学术会议论文集 猪卵母细胞体外成熟及乙醇孤雌激活研究 李晟阳罗光彬张晓华肖焕星刘永 (沈阳农业大学动物胚胎工程实验室，沈阳，110161) 摘要： 成熟的影响和乙醇及乙醇与各种化学试剂联合处理对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活、孤雌生殖胚胎发育的影响．最终找到 了最佳的猪卵母细胞体外成熟培养体系，并确定了乙醇孤雌激活的最佳浓度、作用时间和与不同化学试剂联台处理的最佳 3+3 间为45h，成熟率可达到709％；乙醇的最佳激活浓度为8％．澈活率为296+2．5％：乙醇激活的最佳处理时间为10分 7％．9 6~8细胞率均高于乙醇与CB+CHX处珲组00．3+4．3％vs28．6+39+1．8％vs8．7+1．2％)。因此，乙醇激活的最佳方法为： 8％乙醇处理10分钟，CB+6-DAMP处理7小时。 关键词： 猪；PMsG；llCO；基础培养液；孤雌激活；乙醇 猪体细胞克隆技术在生物医药方面重要应用就 3层或以上，包裹致密，卵母细胞胞质黑色均一；B 是在异种器官移植上，因为猪的器官和人的器官很相 级：卵丘为1--2层，包裹较为致密，胞质黑色均一： 似，而且猪繁殖快，产仔多，可以作为异种器官移植的 C级：卵丘疏松扩散，胞质较为均一；D级：为裸卵， 供体…；在农业方面，应用猪体细胞克隆技术可改 或细胞质残缺。本实验仅取A、B类COCs用于成熟 良猪的品种，提高猪的生产性能。如我们可以对猪的 培养。 基因进行修饰，使猪的瘦肉率增多，抗病力增强”J。 1,3卵母细胞的体外成熟培养 尽管体细胞核移植技术已在牛、羊、小鼠、猪等动物 上获得成功，但总效率仍很低，而猪的体细胞核移植效 用培养液洗涤3次，移入含成熟培养液滴的35ram培 率更低，出生活仔数与移植胚的比率仅为1％左右。”。。 养皿中，每个液滴50山，覆盖石蜡油，每滴放15-20 很多因素影响核移植胚的发育，其中一重要因素是受 枚，液滴预先在39*0、5％的c02、饱和湿度条件下 体卵母细胞的体外培养成熟率l，’和激活率州低，极大 地限制了猪体细胞克隆在实际生产中的应用。本研究 1．4卵母细胞成熟的判定 旨在克服猪卵母细胞体外成熟、孤雌激活率低的难 体外培养45h的卵母细胞，与含O．1％透明质酸 题，为猪体细胞克隆技术更早地应用于畜牧生产、器 酶的DPBS在培养箱内作用5分钟，随后震荡4分钟 官移植奠定基础。 除去卵丘细胞。在4x10倍实体显微镜下观察第一极 1材料与方法 体是否存在，以第一极体排出作为卵母细胞成熟的标 1．1试剂 准，并取部分压片，在乙醇、冰醋酸(3：1)固定液中 若未经特殊标注，均购于sigma公司。 显微镜观察成熟卵母细胞核。 1．2猪卵巢及卵丘．卵母细胞复合体(cocs)的收集 猪卵巢由沈阳市东生屠宰场采集，摘取刚屠宰的 1．5体外成熟卵母细胞的孤雌激活和孤雌生殖胚胎的 体外培养 母猪卵巢。立即放入添加双抗(国产)的30～35℃ 灭菌生理盐水中，1h内送回实验室。卵巢组织用灭 挑选体外成熟卵母细胞，于各浓度乙醇的DPBS CFIX、 菌的生理盐水清洗3次，除尽周围的脂肪和系膜，用 溶液中作用数分钟，再分别于含10p,g／ml CB、2mM 灭菌的医用纱布吸干，再用