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脂质体介导hTERT反义寡核苷酸对HL细胞增殖及凋亡的影响_医学论文 脂质体介导hTERT反义寡核苷酸对HL细胞增殖及凋亡的影响_医学论文 作者：关则兵 潘学谊 蔡小燕 【摘要】 目的 研究经脂质体介导转染端粒酶逆转录酶（hTERT）反义寡核苷酸(ASODN)对HL细胞增殖、凋亡的影响。方法 运用四唑盐比色（MTT）法检测HL细胞的增殖、Annexin V双标记法细胞早期凋亡流式检测法检测HL细胞的凋亡。结果 hTERT ASODN组（终浓度10 μmol/L）、脂质体介导hTERT ASODN组(终浓度0.5 μmol/L)均能抑制HL细胞增殖，诱导HL细胞凋亡，两组比较差异无显著性。各ASODN组对HL的抑制作用及诱导凋亡作用均弱于阿糖胞苷（终浓度10 μmol/L）（0.01）。结论 脂质体的介导增强了hTERT AS0DN抑制HL细胞增殖及诱导凋亡的作用效果。脂质体介导hTERT ASODN有可能成为化疗外治疗急性白血病的有益补充。 【关键词】 脂质体；端粒酶逆转录酶；反义寡核苷酸；HL细胞；凋亡 Abstract:Objective To investigate the effects of liposome（10 μmol/L）and liposomeosis in the cytarabine group was stronger than the others（0.01）. Conclusions The inhibitory effects on cell proliferation and inducing apoptosis of hTERT AS0DN were enhanced by liposome. Liposomeacute leukemia besides chemotherapy.liposome；telomerase reverse transcriptase；antisense oligodeoxyn Key words:liposome；hTERT；HL；ASODN；apoptosis 恶性肿瘤的形成与端粒酶活性的升高有关［1］，白血病及其细胞株也存在着端粒酶活性的高表达［2］。由于端粒酶逆转录酶（hTERT）是调节端粒酶活性高低的限速决定因子［3］，故利用hTERT mRNA的反义寡核苷酸(ASODN)抑制端粒酶活性有望成为治疗白血病的手段［4］。但在将外源基因引入靶细胞的过程中，很容易被体内的核酸酶降解，失去治疗作用。为探讨经脂质体介导后，能否提高hTERT ASODN抑制HL细胞增殖及诱导凋亡的作用，笔者进行了以下研究。 1 材料与方法 1.1 实验材料 hTERT ASODN：序列为5′［4］，由上海Sangon生物工程公司合成，对其进行全硫代修饰及聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）纯化；阿糖胞苷：哈尔滨博莱制药有限公司产品，产品批号阳离子脂质体Lipofectin：美国Invitrogen公司产品，产品批号：50503。 1.2 细胞培养 HL细胞株培养基为含10%（φ）胎牛血清、100 U/mL青霉素，100 μg/mL链霉素的RPMI培养液，在37 ℃、5％CO2饱和湿度条件的培养箱中培养，2～3 d常规传代换液培养，台盼蓝染色计数，维持细胞活力在90%以上。取对数生长期细胞进行后续实验。 1.3 反义核酸脂质体复合物的制备及转染 hTERT ASODN加灭菌三蒸水充分溶解，浓度配制为100 μmol/L，-20 ℃冰箱保存备用。按照脂质体说明书，取100 μmol/L ASODN溶液5 μL(3.33 μg)加入不含血清及抗生素的RPMI培养液 95 μL，为A液；取阳离子脂质体Lipofectin 20 μL(20 μg)加入不含血清及抗生素的RPMI，为B液。A、B液分置室温30 min后，轻柔混匀，再置室温15 min，即为反义核酸脂质体复合物。取HL细胞，5×105/孔。每孔加不含血清及抗生素的RPMI0培养800 μL，加入反义核酸脂质体复合物200 μL（反义核酸终浓度为0.5 μmol/L），放入 37 ℃ CO2孵箱中转染6 h后进行后续实验。 1.4 分组及加药方法 ASODN组：取HL细胞1×105，加入含10%胎牛血清的RPMI培养液990 μL、加入的1 mmol/L ASODN溶液10 μL（使其终浓度为10 μmol/L ［4］），培养72 h；脂质体介导ASODN组：取转染后HL细胞1×105，改换含10%胎牛血清的RPMI培养液1 000 μL，继续培养72 h；阿糖胞苷组：取HL细胞1×105，加入含10%胎牛血清的RPMI培养液990 μL、加入阿糖胞苷溶液10 μL（