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腺病毒介导HSV_医学论文 腺病毒介导HSV_医学论文 【关键词】 神经胶质瘤 　　【Abstract】 AIM: To observe killing action of HSVtk/GCV system on glioma cells. METHODS: C6 cells were transfected by adenovirus with LacZ gene, then stained with Xgal for measuring the adenovirus transfected efficiency. C6 cells survival and bystander effect were observed after adding 10 mg#12539L-1 GCV to transfected cells. RESULTS: The more the multiplicity of infection (MOI), the more the adenovirus transfected efficiency to C6 cells (r=0.819, 0.05). 100% transfected efficiency needed MOI 100. The killing action of HSVtk/GCV on C6 cells, depended on the amount of AdCMVtk (r=0.870, 0.05). There was high bystander effect. CONCLUSION: Adenovirus mediated HSVtk/GCV system has good killing effect on glioma C6 cells. 　　【Keywords】 tk gene adenovirus glioma 　　【摘要】 目的： 观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/丙氧鸟甘(herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovirHSVtk/GCV)系统对脑胶质瘤细胞的杀伤作用. 方法： 将AdCMVLacZ感染胶质瘤细胞C6，Xgal染色，测定腺病毒的转染率. AdCMVtk感染C6细胞后加入10 mg#12539L-1 GCV，观察肿瘤细胞存活率及旁观者效应. 结果： tk基因对C6细胞的转染率随着腺病毒的感染复数（MOI）量增加而增加(r=0.819, 0.05)，100%转染所需要的MOI为100. AdCMVtk/GCV对C6细胞的杀伤强度与AdCMVtk的量成正相关(r=0.870, 0.05). 此杀伤作用存在旁观者效应，且较强. 结论： 腺病毒介导的HSVtk/GCV系统具有杀伤脑胶质瘤的作用. 　　【关键词】 tk基因；腺病毒；神经胶质瘤 　　0引言 　　HSVtk基因是一种自杀基因，其产物将无毒的核苷类似物转变成有毒物质，干扰肿瘤细胞DNA合成，从而将肿瘤细胞杀死［1］. 我们对HSVtk/GCV系统治疗脑胶质瘤进行了体外的实验性研究. 　　1材料和方法 　　1.1材料AdCMVLacZ，AdCMVtk由日本Dr.takabashi惠赠. Xgal，GCV，MTT为Sigma公司产品. 293细胞、C6细胞由本室保存，均在含100 mL#12539L-1新生牛血清（Gibco公司产品）、100 mg#12539L-1青霉素、100 mg#12539L-1链霉素的RPMI 1640（Gibco公司产品）培养基中培养. 　　1.2方法AdCMVLacZ，AdCMVtk在293细胞中扩增，氯化铯密度梯度离心法纯化，以含100 mL#12539L-1甘油的透析液透析，并用噬斑分析法测定腺病毒滴度. C6细胞按2×105/孔接种于6孔板，用感染复数（MOI）为1，10，50，100和200的AdCMVLacZ感染48 h后用0.5 g#12539L-1戊二醛固定，Xgal（终浓度1 g#12539L-1）染色. 光镜下观察，蓝色细胞说明有LacZ基因表达，即已被腺病毒转染. 计蓝色细胞占细胞总数的百分率，即腺病毒的转染率. 实验重复3次，取其平均值. C6细胞按5×103/孔接种于96孔板，24 h后用不同MOI的AdCMVtk（1， 10， 50， 100和200）感染，3 h后加入10 mg#12539L-1 GCV，对照组加PBS，每组设3复孔. 5 d后每孔加入5 g#12539L-1 MTT 10 μL，4 h后吸掉上清，加入50 μL二甲基亚砜，振荡混匀后，用酶标仪测定A值. 细胞存活率按公式（A实验组/A对照组）×100%计算. 未转染的C6细胞与