药物敏感试验指导小鼠胃癌化疗对凋亡及P53基因的影响_医学论文.docVIP

药物敏感试验指导小鼠胃癌化疗对凋亡及P53基因的影响_医学论文 药物敏感试验指导小鼠胃癌化疗对凋亡及P53基因的影响_医学论文 【摘要】 　　目的： 通过应用药敏试验筛选化疗药物对多次传代的荷瘤鼠进行化疗，了解其疗效以及对移植瘤凋亡及P53基因的影响. 方法： 用MTT法检测小鼠胃癌细胞对6种化疗药物的敏感性，对荷瘤鼠进行化疗，观察化疗后移植瘤的体积、抑瘤率，检测凋亡及P53基因的表达. 结果： 用MTT法筛选最敏感的化疗药5对第一代荷瘤小鼠进行化疗，其抑瘤率高，凋亡率高，P53基因的表达下降，与对照组比较有显著性差异；最不敏感的ADM化疗组抑瘤率低，凋亡率低，P53基因的表达高于对照组(P＜0.05). 再对已行化疗的胃癌细胞筛选最敏感药物为DDP，最不敏感药物为用MMC，对第二代荷瘤小鼠进行化疗，发现DDP组抑瘤率高，凋亡率高，P53基因的表达较对照组低(P＜0.05)；MMC组抑瘤率低，凋亡率低, P53蛋白表达高，与对照组比较无显著性差异. 而继用5和ADM化疗对第二代荷瘤小鼠进行化疗，抑瘤率低，凋亡率低，P53基因的表达高，与对照组比较无显著性差异. 结论： 药敏试验、凋亡及P53基因的检测可作为化疗药物的选择及判断预后的指标. 【关键词】 药物敏感试验 胃肿瘤 细胞凋亡 基因 P53 0引言 如何选择敏感抗癌药，制定胃癌的个体化治疗方案，是提高胃癌化疗的关键. 我们通过应用小鼠胃癌细胞筛选化疗药物，对多次传代的荷瘤鼠进行化疗，检测化疗后小鼠胃癌组织中P53的表达及凋亡情况，并分析是否与其临床疗效一致，探讨临床化疗药物的选择、对荷瘤鼠胃癌组织中P53的表达和凋亡的影响，以便实施科学的、药物适配的个体化方案. 1材料和方法 1.1材料小鼠胃癌细胞株 MFC TCM23(中科院上海细胞所)；MTT，细胞培养基，胎牛血清，TUNEL，P53试剂盒购自武汉博士德公司. 卡铂(CBP)、顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、5氟尿嘧啶(5、甲氨蝶呤(MTX)、丝裂霉素(MMC)均为国产药品. 昆明小鼠(清洁级,购自南方医科大学实验动物中心,珠江医院动物所饲养),雄性,1月龄,体质量18~22 g. 1.2方法 1.2.1胃癌细胞株对化疗药物敏感性取对数生长期细胞制成含活细胞(3~6)×108/L的细胞悬液，在96孔培养板中每孔加入胃癌细胞悬液200 μL，培养贴壁后离心去上清，加入培养液190 μL/孔,加入下列抗肿瘤药物10 μL/孔,即CBP, DDP, ADM, 5，每种药物终浓度为血浆峰值浓度，每种药物3个复孔，阴性对照为培养液, 37℃ CO2培养48 h，取出各孔加MTT(5 g/L)20 μL,继续培养4 h,离心弃上清后, 每孔加二甲基亚砜100 μL终止反应.置酶标仪测定各孔在570 nm波长值. 抑制率=［1-用药组A/对照组A］×100%. 根据抑制率筛选敏感、不敏感化疗药物. CBP, DDP, ADM, 5的抑制率为41.9%, 47.2%, 26.5%, 49.6%, 31.2%, 30.0%, 5抑制率最高，ADM抑制率最低. 1.2.2动物模型及分组将 MFC细胞制成含活细胞109/L细胞悬液0.1 mL，接种于小鼠后肢皮下,约7 d在接种部位长出直径1.5 cm左右的移植瘤. 对照组1： 用胃癌细胞株接种小鼠10只，接种7 d末鼠尾静脉给予生理盐水0.2 mL，共5 d，接种12 d末处死小鼠取瘤块. 实验组1：用胃癌细胞株接种小鼠10只，接种7 d末鼠尾静脉给予5（高敏感药），30 mg/（kg·d），共5 d，化疗5 d末处死小鼠取瘤块. 实验组2：用胃癌细胞株接种小鼠10只，接种7 d末鼠尾静脉给予ADM（低敏感药），0.8 mg/（kg·d），共5 d，化疗5 d末处死小鼠取瘤块. 处死小鼠后瘤块一部分作石蜡包埋，一部分制成单个细胞悬液再接种小鼠，实验组1、实验组2的10只小鼠的一部分单个细胞悬液再行MTT法检测化疗药物敏感性，已用5化疗后的小鼠胃癌细胞对CBP, DDP, ADM, 5的抑制率为47.8%, 50.2%, 14.9%, 23.5%, 35.0%, 35.5%,筛选出最敏感的化疗药物为DDP. 已用ADM化疗后的小鼠胃癌细胞对CBP, DDP, ADM, 5的抑制率为41.6%, 32.3%, 22.2%, 37.0%, 35.9%, 20.2%，筛选出最不敏感的化疗药物为MMC. 　对照组2：用对照组1的10只小鼠胃癌细胞再接种小鼠10只，接种7 d末鼠尾静脉给予生理盐水0.2 mL，共5 d，接种12 d末处死小鼠取瘤块. 实验组3： 用实验组1的10只小鼠胃癌细胞再接种小鼠10只，接种7 d末鼠尾静脉给予5，30 mg/（kg·d），共5 d，化疗