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血管钠肽抑制低氧刺激心成纤维细胞c┐fos的表达_医学论文 血管钠肽抑制低氧刺激心成纤维细胞c┐fos的表达_医学论文 作者：郭海涛　朱妙章　吕顺艳　于军　董明清　高瞻　施溥涛 【关键词】,血管钠肽 　　关键词:血管钠肽低氧心成纤维细胞c-fosCa2+ 　　摘要:目的研究血管钠肽（VNP）对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响，并对其机制进行探讨.方法分离纯化乳鼠心成纤维细胞，随机分为4组:对照组、低氧组（20～30mL#12539L-1）、VNP组（10-8～10-6mol#12539L -1）和VNP（10-6mol#12539L-1）+低氧组.以免疫组织化学染色方法观察各组c-Fos的表达情况，采用激光共聚焦方法测定了［Ca2+］i水平.结果①低氧组较对照组可以显著升高Fos样免疫阳性细胞数及染色强度（0.05）②VNP预处理心成纤维细胞可以减弱低氧的作用（0.05vs低氧组），但Fos的表达量仍高于对照组（0.05）③对照组［Ca2+］i水平无显著变化，低氧组［Ca2+］i水平显著升高，而VNP能使升高的［Ca 2+］i水平较对照组和低氧组显著降低（0.05）.结论VNP能减弱低氧对心成纤维细胞生长的刺激作用，其机制可能与Ca2+等信号转导分子及c-fos表达有关. 　　Keywords:vasonatrinpeptidehypoxiacardiacfibroblastsc-fosCa2+ 　　Abstract:Chiefaimofthepresentworkwastoinvestigatevasonatrinpeptide（VNP）attenuateshypoxia-induced　expressionofc-fosgeneincardiacfibroblastsfromculturedneonatalrats.Theculturedcardiacfibroblastsweredividedrandomlyintofourgroups:Controlgroup，hyoxiagroup（20～30mL#12539L-1），VNPgroup（10-8～10-6mol#12539L-1）andVNP（10-6mol#12539L-1）+hypoxiagroup.Thec-Fosexpres-sionofcardiacfibroblastswasmeasuredbythemeansofim-munocytochemistry，［Ca 2+］iconcentrationwasmeasuredbythemeansofinteractivelasercytometer.Thestudiesper-formedwiththesetechniquesshowthathypoxiaincreasedsignificantlythepositivecellsandmeangreyofcardiacfi-broblasts（0.05vscontrolgroup），VNPdecreasedthepositivecells（0.05vscontrolgroup）anddecreasedthelevelof［Ca2+］iinVNP+hypoxiagroup.Thesefindingsindi-catethatVNPcanattenuatehypoxia-inducedexpressionofc-fosgeneincardiacfibroblastswhichwasassociatedwiththechangesofthe［Ca2+］i. 　　0引言 　　低氧性心室肌肥厚是高原性心脏病的主要表现之一，而心室肌肥厚的原因除了心肌细胞的肥大外，心肌间质细胞的增殖、间质纤维化也是重要的原因，而且心成纤维细胞分泌许多生长因子，通过旁分泌途径影响心肌细胞的增殖.因此，了解影响心成纤维细胞增殖和基因表达的因子非常必要.钠尿肽是一多肽家族，具有利钠利尿以及抑制心肌肥厚的作用.ANP（心房钠尿肽）可抑制低氧引起的心成纤维细胞的增殖［1］，VNP（血管钠肽）是ANP和C-型钠尿肽（CNP）的嵌合体，可能与ANP有相似的药理效应［2，3］.低氧可引起心成纤维细胞增殖，细胞内钙增多，以及c-Fos表达增高［4］.关于VNP对c-fos表达的调控，目前国内外尚无报道.我们观察VNP是否减弱低氧刺激的心成纤维细胞增殖，及其是否影响c-fos表达以及机制. 　　1材料和方法 　　1.1材料SD乳鼠（1～2d）由本校实验动物中心提供，胰酶购于DIFCO公司，胶原酶、EDTA，DMEM培养基、小牛血清购于Gibco公司，VNP由中国科学院上海生物化学研究所提供，BrdU（5’-溴-2-脱氧尿苷）购于Sigma公司，c-Fos抗体购于Sa