靛酚蓝_分光光度法测定发酵液中氨态氮含量研究.pdfVIP

食品与发酵工业 FOOD ANDRM EN TA TION INDU STR IES 靛酚蓝分光光度法测定发酵液中氨态氮含量研究 1 2 3 梁剑光 　朱 　玲 　徐正军 ( ) ( ) 1 常熟理工学院生物与食品工程系 ,常熟 ,2 15500 　2 南京工业大学制药与生命科学学院 ,南京 ,2 10009 3 ( 山东鲁南制药股份有限公司 ,临沂 ,276000) 摘 　要 　靛酚蓝 - 分光光度法是一种灵敏度高 ,对设备要求简单 ,线性相关性好 ,重现性高的氨态氮检测方法 。 文中对该方法的检测波长 、反应温度 、时间以及催化剂浓度等条件进行了优化 ,确定了检测波长为 637 nm ,反应 条件为 37 ℃、25 mg/ L 的催化剂和 20 min 的反应时间 ,并由此得到一条线性相关系数为 0 999 6 的氨态氮标准 曲线 。同时 ,对靛酚蓝法用于普通发酵体系测定氨态氮进行了探讨 。对常用发酵基质如碳源 、氮源 、金属离子以 及消泡剂等进行了考察 ,结果发现这些常用基质基本不影响本法的测定结果 。最后 ,将该法用于泰乐菌素和阿 维菌素的发酵液测定并与离子选择电极法进行了比较 ,两种方法的测定结果无显著性差异 , 由此证明该方法是 一种准确可靠 ,切实可行的检测发酵液中氨态氮的方法 。 关键词 　靛酚蓝 ,分光光度法 ,氨态氮 ,发酵 　　在微生物的发酵过程中 ,无机氨态氮是一种重要 本文是在进一步优化完善靛酚蓝方法的同时 ,对 的氮源物质 ,其浓度可影响发酵过程中菌体的生长和 于该方法用于生物发酵领域中的氨氮检测进行了深 产物的合成 。有报道 ,高浓度的 N H + 会阻遏力复霉 入探讨 ,对于在发酵过程中可能影响靛酚蓝显色的一 4 素 、氯霉素 、放线菌素和 白霉素的生物合成[ 1 ] 。在头 些因素进行了研究 ,并由此确定了该方法的适应性 , 孢菌素的发酵中 ,N H + 的积累超过 40 mmol/ L 就会 为发酵工业的氨态氮监测寻找了一种较为简便 、切实 4 阻遏其的合成[2 ] 。为此 ,在发酵过程中 ,对于氨态氮 可行的方法 。 的监测非常重要 ,如通过控制氨态氮的水平来增加泰 1 　材料与方法 乐菌素和柱晶白霉素的生产 。 ( 1. 1 　仪器与试剂 目前 ,用于氨态氮检测的手段主要有滴定法 甲 醛滴定 、蒸馏法) [3 ] 、电位滴定法 、氨选择性电极法[4 ] 1. 1. 1 　仪 　器 ( [5 ] [6 ] ) 和分光光度法 靛酚蓝法 和纳氏试剂法 等 。滴 U VV IS8500 紫外可见分光光度计 ,上海天美科 定法操作较为繁琐 ; 氨选择性 电极法则相对较为方 学仪器有限公司 ; HH2 型电热恒温水浴锅 ,江苏金 便 ,但是在含有表面活性剂悬浮颗粒以及其它的一些 坛国华仪器有限公司 ;30 L 发酵系统 ,江苏镇江东方 复杂体系中则难以应用[7 ] ;分光光度法则是一种操作 生物工程设备有限公司 。 方便 、重现性和准确度都比较高的分析方法 ,在氨态 1. 1. 2 　试 　剂